[发明专利]利用膜片钳技术筛选乳源中促睡眠肽粗提物的方法

权利要求书

1.一种利用膜片钳技术筛选乳源中促睡眠肽粗提物的方法，其特征在于，包括以下步 骤：

（1）在容器中加入水，升温至40℃-60℃，加入牛乳和蛋白酶进行酶解，酶解条件为：水 和牛乳体积比为100：10-15、pH值7.5-8.5、时间2-4h，所述蛋白酶为胰蛋白酶和胃蛋白酶， 胰蛋白酶的加入量为牛乳质量的0.2%-0.6%，胃蛋白酶的加入量为牛乳质量的0.06%- 0.12%，酶解完成后，灭酶，喷雾干燥，得粉状酪蛋白水解物；

（2）酪蛋白水解物通过等电点沉淀分离，条件为pH4.5-6、乙醇浓度60%-90%、沉淀时间 为1-3h；

（3）采用反相钢柱，将步骤（2）所得沉淀物通过制备液相，再次对样品进行分离纯化，根 据样品极性的不同，将样品分为若干段，通过建模，对该促睡眠粗体物进行活性评价；

（4）急性分离大鼠的下丘脑腹外侧视前区脑片，厚度约300-500um，然后采用全细胞膜 片钳技术，借助去极化方波，给予30-60PA,3000-4000ms诱发动作电位，给药100-150μmol /L,记录电生理图谱，通过放电数目和频率，筛选出具有较好促睡眠的活性片段。

2.根据权利要求1所述得利用膜片钳技术筛选乳源中促睡眠肽粗提物的方法，其特征 在于，步骤（1）中，所述水和牛乳体积比为100：12。

3.根据权利要求1所述得利用膜片钳技术筛选乳源中促睡眠肽粗提物的方法，其特征 在于，步骤（1）中，所述酶解分两步进行，第一步：调节溶液pH8，开搅拌300rpm，投入胰蛋白 酶，酶解3h，灭酶，胰蛋白酶的加入量为牛乳质量的0.3%；第二步：调节pH为5，加入胃蛋白 酶，将温度调到40℃，酶解2h，胃蛋白的加入量为牛乳质量的0.1%。

4.根据权利要求1所述得利用膜片钳技术筛选乳源中促睡眠肽粗提物的方法，其特征 在于，步骤（1）中，所述灭酶温度为90℃，时间30分钟。

5.根据权利要求1所述得利用膜片钳技术筛选乳源中促睡眠肽粗提物的方法，其特征 在于，步骤（2）中，等电点沉淀条件为：pH5，乙醇浓度70%，沉淀3h后，4℃下静置4小时。