[发明专利]用于全基因组甲基化重亚硫酸氢盐测序的文库构建方法

摘要

本发明提供一种用于全基因组甲基化重亚硫酸氢盐测序的文库构建方法，其适用于中量级别(5～200ng)的起始样本量。该文库构建方法包括从5～200ng的基因组DNA得到片段化的基因组DNA；对上述片段化的基因组DNA进行重亚硫酸氢盐处理，得到单链的重亚硫酸氢盐处理产物；以上述单链的重亚硫酸氢盐处理产物为模板，使用含生物素标记的oligo1引物合成第一条链；使用核酸外切酶消化第一条链合成后体系中的单链DNA；使用链亲和素磁珠调取生物素标记的第一条链；以上述生物素标记的第一条链为模板，使用oligo2引物合成第二条链；以及，以所述第二条链作为模板进行PCR扩增，从而构建二代测序用DNA文库。

主权项

1.一种用于全基因组甲基化重亚硫酸氢盐测序的文库构建方法，该方法包括：步骤A：将5～200ng的基因组DNA用超声波打断仪片段化，得到片段化的基因组DNA；步骤B：对上述片段化的基因组DNA进行重亚硫酸氢盐处理，得到单链的重亚硫酸氢盐处理产物；步骤C：以上述单链的重亚硫酸氢盐处理产物为模板，使用含生物素标记的oligo1引物合成第一条链；步骤D：使用核酸外切酶消化第一条链合成后体系中的单链DNA；步骤E：使用链亲和素磁珠调取生物素标记的第一条链；步骤F：以上述生物素标记的第一条链为模板，使用oligo2引物合成第二条链；以及步骤G：以所述第二条链作为模板进行PCR扩增，从而构建二代测序用DNA文库；其中，所述步骤C中使用了10～100pmol的oligo1引物；所述步骤A中用超声波打断仪片段化的条件为：超声打断30秒，停30秒，重复22次；所述步骤A的所述基因组DNA为人类基因组DNA；所述步骤C中采用如下反应体系合成所述第一条链：所述步骤G中采用如下反应体系合成所述第二条链：以50μL体系计，所述生物素标记的第一条链溶于其中，所述Oligo1的序列为5'‑(Biotin)TACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCTNNNNNNNNN‑3'，所述Oligo2的序列为5'‑GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTNNNNNNNNN‑3'，N为选自A、T、C、G的任意碱基。