[发明专利]CD28基因过表达载体及其应用有效
| 申请号： | 201510557737.8 | 申请日： | 2015-09-02 |
| 公开（公告）号： | CN105112449B | 公开（公告）日： | 2018-02-06 |
| 发明（设计）人： | 索勋;李秋艳;黄广平;刘贤勇;李志远;李向清;付怡静;王一丁;田秀玲;索静霞;胡丹丹;徐邢宾;沈良才 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明提供一种CD28基因过表达载体及其应用，所述过表达载体是以目标生物基因组为模板，PCR扩增ROSA26基因第一内含子的左、右同源臂，CD28基因表达框，OCT4基因启动子，然后将同源左臂，CD28基因表达框，含LoxP位点的OCT4基因启动子调控的Cre表达框和Neo基因表达框，同源右臂以及负筛选标记DTA依次连接，并构建到真核表达载体上得到。将该载体与含特异性靶向猪ROSA26基因第一内含子的CRISPR/Cas9打靶载体共转入猪胎儿成纤维细胞中，以阳性细胞为供体细胞，卵母细胞为受体细胞，通过体细胞核移植技术获得克隆胚胎；将克隆胚胎移入猪子宫内妊娠获得在ROSA26基因第一内含子定点整合有CD28基因且自动敲除标记基因的转基因猪。 | ||
| 搜索关键词： | cd28 基因 表达 载体 及其 应用 | ||
【主权项】：
CD28基因过表达载体，其特征在于，以目标生物基因组为模板，PCR扩增ROSA26基因第一内含子的左、右同源臂，CD28基因表达框，OCT4基因启动子，然后将同源左臂，CD28基因表达框，含LoxP位点的OCT4基因启动子调控的Cre表达框和Neo基因表达框，同源右臂以及负筛选标记DTA依次连接，并构建到真核表达载体上，即得CD28基因过表达载体。
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