[发明专利]一种具有抗肿瘤活性的龙葵精制多糖的提取纯化方法

摘要

本发明公开了一种新的、相对安全、得率高、纯度高、具有抗肿瘤活性的龙葵精制多糖的提取纯化工艺路线，其步骤如下龙葵粉末粉碎过筛，依次采用石油醚、乙醇脱脂，再用闪式提取，经浓缩醇沉后，以三氯乙酸脱蛋白，活性炭脱色，二次醇沉，最后干燥制得龙葵精制多糖，得率为2.554%。该产物对H22肝癌细胞的体外生长具有抑制作用，1.4‑1.8 mg/mL浓度时细胞抑制率35.80‑85.4%，对H22荷瘤小鼠的肿瘤生长具有抑制作用，抑制率为37.73%‑42.60%。

主权项

一种具有抗肿瘤活性的龙葵精制多糖的提取纯化方法，其特征在于包括以下步骤：(1)龙葵粗多糖样品的制备：龙葵饮片40‑60℃干燥6‑8h后，粉碎过40目筛，制得龙葵粉末；将龙葵粉末加入4‑5重量倍石油醚，于50‑55℃水浴条件下，加热回流脱脂2次，每次2h，过滤去液留渣；将药渣加入2倍重量的80％乙醇，于80℃水浴条件下加热回流2次，每次1h，过滤去液留渣，药渣晾干，制成已脱脂的龙葵粉末；将上述已脱脂的龙葵粉末置于闪式提取仪的容器中，加蒸馏水30重量倍，以80V电压闪式提取2次，每次2min；合并提取液，纱布过滤，以3000r/min离心15min，取上清液减压浓缩至50％药材体积，在搅拌下加入乙醇调节含醇量至80％，2‑6℃静置冷藏12‑24h，减压抽滤，沉淀用无水乙醇、乙醚依次洗涤2‑3次后，60℃真空干燥，得龙葵粗多糖；(2)龙葵精制多糖的纯化：将步骤(1)所得的龙葵粗多糖用蒸馏水溶解配成质量浓度为1％的溶液，用3％‑5％三氯乙酸溶液缓缓调节pH至2.5‑3.0，振荡处理20min，2‑6℃静置2‑4h，以3000r/min离心10min去除胶状蛋白沉淀；在上清液中加入活性炭，以稀HCl调节pH至5，40℃保温脱色20min，静置1h后，以4000rpm/min离心20min除去沉淀；将上清液加入4倍量的95％乙醇沉淀，2‑6℃静置冷藏12‑24h，以4000rpm/min离心收集沉淀，用无水乙醇、乙醚依次洗涤2‑3次后，60℃真空干燥得龙葵精制多糖。