[发明专利]一种同时测定人他克莫司作用靶点基因多态性的方法

摘要

本发明属于分子生物学和医学检验技术领域，涉及一种同时测定人他克莫司作用靶点信号通路系列蛋白编码基因多态性的基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱方法。本发明对样本进行DNA提取后，进行多重PCR扩增，单碱基延伸反应后，应用飞行时间质谱方法进行对样品进行基因分型分析。所述方法操作简便、无需序列特异性探针，可对多个样本多重检测，每个体系可实现40重反应，同时检测40个SNP位点，具有高通量，适用范围广，同时检测多至成千上万个样本，几十到成百上千个位点；无需荧光标记，仅需合成普通引物，单个分析成本低；高灵活度，分析所需样本量少，高灵敏度，检测精度高。适合临床常规基因检测，进一步为临床个体化合理用药提供技术支撑。

主权项

一种同时测定人他克莫司作用靶点基因多态性的方法，其特征在于，对待测样品基因组DNA提取，经PCR扩增后，SAP处理、单碱基延伸后，产物纯化，用飞行时间质谱仪进行检测，进行基因分型，通过以下步骤：(1)设计序列特异性引物查找目的基因的DNA序列，针对目的基因的突变位点设计筛选合适的引物对；并根据不同的位点，组合成不同的PCR反应体系；(2)提取外周血细胞样本的基因组DNA，利用步骤(1)筛选的引物进行基因扩增；(3)扩增的PCR产物进行SAP处理，进行单碱基延伸反应，纯化后得样品分析物；(4)样品分析物点样至芯片基质，用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行分析，获得样品分析物的分子量，检出SNP位点信息，完成基因分型分析。