[发明专利]芽孢杆菌的分离方法及用芽孢杆菌制作发酵茶的方法

摘要

芽孢杆菌的分离方法包括初筛挑选能产芽孢的细菌；复筛能产生纤维素酶的菌株，复筛选出能产生乙偶姻的菌株。用芽孢杆菌制作发酵茶的方法包括摊凉，杀青，揉捻，分离菌株，接种芽孢杆菌种子液；发酵：将接种好的茶叶放入恒温培养箱，适应积累阶段1-2天，发酵阶段2-3天，熟化阶段2-3天，产香干燥阶段2-3天；发酵阶段、熟化阶段和产香干燥阶段的培养温度梯度上升，发酵阶段的第一天的温度与适应积累阶段的温度一样；对发酵茶成品进行包装。本发明具有使芽孢杆菌在好氧环境下梯度升温固体发酵茶叶，利用茶叶本身碳源与氮源进行好氧性固体发酵产生香味，茶叶水分在发酵过程中逐渐减少，发酵后不用烘干的优点。

主权项

芽孢杆菌的分离方法包括以下步骤：A、初筛：茶园取土壤样，按每10g土壤样加30ML水的比例加入水，常压加热至水沸腾后维持10min以上；冷却后取得上清液，将上清液涂布于营养肉汤琼脂培养基，营养肉汤琼脂培养基的pH值为7.2；将涂布有上清液的营养肉汤琼脂培养基在30℃培养24小时，后挑选单个菌落进行纯化分离到纯种菌落为止；对单菌落进行芽孢生产检测，挑选能产生芽孢的细菌做下一步筛选，初筛完成；B、纤维素酶产生菌株复筛：对初筛的菌落接种于纤维素鉴定平板，纤维素鉴定平板具有刚果红‑羧甲基纤维素钠筛选培养基，筛选能产生明显透明圈的菌落进行下一步筛选；C、乙偶姻产生菌株复筛选：利用V‑P试验对乙偶姻生产菌株进行测定：用琼脂培养物将纤维素酶产生菌株复筛获得的菌落接种于葡萄糖蛋白胨水中，葡萄糖蛋白胨水的pH值为7.2‑7.4；菌落经葡萄糖蛋白胨水培养后，在35～37℃ 培养48‑96小时，之后检测培养物中是否存在乙偶姻，若存在乙偶姻，即表明该菌株能生成乙偶姻。