[发明专利]牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒

摘要

本发明涉及牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒。本试剂盒使用了申请单位上世纪60年代诱导驯化的猪种布鲁氏菌S2株脂多糖(LPS)作为包被抗原，提高了检测的敏感性；本研究改进了LPS纯化和纯度测定的方法，使开发的试剂盒具有良好的特异性，该试剂盒不仅能有效排除常规革兰氏阴性细菌对布鲁氏菌的干扰，而且能排除一般布病间接ELISA试剂盒无法区分小肠结肠炎耶尔森氏菌O9和大肠杆菌O157干扰的技术缺陷，提高了检测的特异性。本发明通过对主要试剂配方的改进和优化，不仅有效控制试剂盒的反应背景，而且缩短了检测所需的时间。

主权项

一种牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于该试剂盒主要含有：以制备的光滑型猪种布鲁氏菌S2株的脂多糖(LPS)作为包被抗原，以人工免疫健康牛制备阳性血清，以采集健康非免疫牛血清作阴性血清，以HRP标记兔抗牛IgG、底物溶液、终止液、样品稀释液、HRP标记兔抗牛IgG稀释液及20×洗涤液等组分组装而成，用于检测牛血清中的光滑型布鲁氏菌抗体。其中：(1)该试剂盒中使用的包被抗原LPS来源于猪种布鲁氏菌(S2株)，该LPS对猪、牛、羊布鲁氏菌病的病原菌具有良好的敏感性，提高了试剂盒检测的敏感性；(2)LPS提取过程中增加了蛋白酶K消化和苯酚抽提步骤，提高了LPS纯度，减少了LPS中阴杂蛋白含量过高导致的非特异性反应；本试剂盒不仅能有效排除常规革兰氏阴性细菌对布鲁氏菌的干扰，而且能排除一般布病间接ELISA试剂盒无法区分小肠结肠炎耶尔森氏菌O9和大肠杆菌O157干扰的技术缺陷，提高了检测的特异性；(3)LPS的包被量基于对其纯度和质量的测定；(4)本发明通过对主要试剂配方的改进和优化，有效控制试剂盒的反应背景，缩短了检测所需的时间。