[发明专利]牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒

权利要求书

1.一种牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于该试剂盒主要含有：以制备的光滑型猪种布鲁氏菌S2株的脂多糖(LPS)作为包被抗原，以人工免疫健康牛制备阳性血清，以采集健康非免疫牛血清作阴性血清，以HRP标记兔抗牛IgG、底物溶液、终止液、样品稀释液、HRP标记兔抗牛IgG稀释液及20×洗涤液等组分组装而成，用于检测牛血清中的光滑型布鲁氏菌抗体。其中：

(1)该试剂盒中使用的包被抗原LPS来源于猪种布鲁氏菌(S2株)，该LPS对猪、牛、羊布鲁氏菌病的病原菌具有良好的敏感性，提高了试剂盒检测的敏感性；

(2)LPS提取过程中增加了蛋白酶K消化和苯酚抽提步骤，提高了LPS纯度，减少了LPS中阴杂蛋白含量过高导致的非特异性反应；本试剂盒不仅能有效排除常规革兰氏阴性细菌对布鲁氏菌的干扰，而且能排除一般布病间接ELISA试剂盒无法区分小肠结肠炎耶尔森氏菌O9和大肠杆菌O157干扰的技术缺陷，提高了检测的特异性；

(3)LPS的包被量基于对其纯度和质量的测定；

(4)本发明通过对主要试剂配方的改进和优化，有效控制试剂盒的反应背景，缩短了检测所需的时间。

2.权利要求1所述牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于LPS抗原的纯度测定方法是：

将商品化LPS标准品稀释成1mg/ml、100μg/ml、10μg/ml、1μg/ml、100ng/ml、10ng/ml等不同稀释度；同时根据称重结果将LPS配制成1mg/ml的初始浓度，并稀释成100μg/ml的浓度。将上述各稀释度的LPS溶液取100μl/样品加入96孔酶标板上，在529nm波长下读取吸光度。建立LPS标准品各稀释度的OD529值，并建立浓度与吸光度之间的标准曲线。根据标准曲线以及布鲁氏菌LPS吸光度，计算LPS的浓度。LPS纯度为：LPS浓度×单位体积/单位质量。

3.权利要求1所述牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测试剂盒的应用，其特征在于使用该试剂盒能对牛布鲁氏菌病进行高通量检测。