[发明专利]一种利用3D打印技术促进人未成熟卵母细胞体外成熟的方法在审
申请号: | 201510378273.4 | 申请日: | 2015-07-01 |
公开(公告)号: | CN105039245A | 公开(公告)日: | 2015-11-11 |
发明(设计)人: | 金帆;张帆;马梁;全胜;蔡立义;王丽雅;王大辉;姜中石;张诚程;张无忧;王祺婧 | 申请(专利权)人: | 浙江大学;杭州安体科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/075 | 分类号: | C12N5/075 |
代理公司: | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人: | 叶志坚 |
地址: | 310058 浙江*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | 本发明公开一种利用3D打印技术促进人未成熟卵母细胞体外成熟的方法。该方法是将临床采集分离得到的颗粒细胞首先采用体外培养的方法进行增殖,培养2~7天;将生物水凝胶与预处理后的颗粒细胞混合均匀,采用生物3D打印出人造卵泡;在人造卵泡中加入含体积百分含量≥10﹪人成熟卵泡液的培养液,培养24~48h后加入未成熟卵母细胞-卵丘颗粒细胞复合体,3D细胞培养24~48小时帮助其成熟。本发明采用3D含细胞打印技术,采用人体颗粒细胞来构建未成熟卵母细胞3D培育系统,同时加入多种生长因子和模拟卵泡培养液,创造出一个真实模拟人体内卵泡的环境来促使未成熟卵母细胞的体外成熟。 | ||
搜索关键词: | 一种 利用 打印 技术 促进 未成熟 细胞 体外 成熟 方法 | ||
【主权项】:
一种利用3D打印技术促进人未成熟卵母细胞体外成熟的方法,其特征在于该方法包括以下步骤:步骤(1)、颗粒细胞的预处理:将临床采集分离得到的颗粒细胞首先采用体外培养的方法进行增殖,放入37℃、含体积含量5﹪CO2的细胞培养箱培养2~7天,每2天更换培养基一次;取对数生长期的细胞,采用胰蛋白酶消化后制成细胞悬液;所述的体外培养采用的培养基为在TCM199培养基中加入体积含量10﹪胎牛血清、体积含量0.1﹪青霉素‑链霉素混合物;步骤(2)、将生物水凝胶与预处理后的颗粒细胞混合均匀,作为3D打印用墨水;其中每mL生物水凝胶加入105~107数量的颗粒细胞;步骤(3)、由于生物水凝胶的选择不同,采用不同成熟凝胶化手段,将3D打印用墨水制成3D打印用凝胶;步骤(4)、采用生物3D打印的方法将步骤(3)得到的3D打印用凝胶打印成具有生产工艺需求形状的产品,即人造卵泡;步骤(5)、在步骤(4)打印完成的产品中加入含体积百分含量≥10﹪人成熟卵泡液的培养液中,培养24~48h后得到人造颗粒细胞半球;其中所述的培养液为:TCM199培养基,0.075IU/ml FSH,0.15IU/ml hCG,0.2μg/ml的17β‑雌二醇,体积含量10﹪FCS,体积含量≥10﹪处理后的人成熟卵泡液;步骤(6)、在步骤(5)得到的人造颗粒细胞半球中加入未成熟卵母细胞‑卵丘颗粒细胞复合体,然后采用3D细胞培养的方式培养24~48小时来帮助其成熟,最后得到成熟卵母细胞。
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- 本发明提供了一种提高体外受精胚胎发育率的方法,在确定卵母细胞成熟培养时间范围的基础上,检测成熟卵母细胞中谷胱甘肽含量,将卵母细胞体外成熟培养至谷胱甘肽含量下降前进行体外受精。本发明为今后体外受精胚胎的生产和相关科学研究奠定了基础。
- 一种用于卵细胞拆蛋的液滴分配系统及液滴分配方法-201810110974.3
- 汝长海;魏顶;孙钰;王勇;朱军辉 - 苏州大学
- 2018-02-05 - 2018-06-15 - C12N5/075
- 本申请提供了一种用于卵细胞拆蛋的液滴分配系统及液滴分配方法,所述的液滴分配系统包括工作台、设置在所述的工作台上的用于放置培养皿的载物台、用于向所述的载物台上的培养皿内分别滴加试剂和盖油的分液针头和盖油针头、用于安装所述的分液针头和盖油针头并能够控制分液针头和盖油针头运动的动作执行装置。本申请所述的一种用于卵细胞拆蛋的自动化液滴分配系统及分配方法,操作简单、液滴制备效率高、液滴定位精度高,能够实现液滴的自动化盖油,防止液滴挥发和受到污染,同时为自动化显微拆蛋打下了基础。 1
- 一种GV期卵母细胞冷冻保存液及冷冻保存方法-201510528179.2
- 曹新燕;李井春;徐超;赵家平;赵伟刚;李雁冰;张宇飞;赵蒙;薛海龙;刑明杰;王丽英 - 中国农业科学院特产研究所
- 2015-08-26 - 2018-03-06 - C12N5/075
- 一种GV期卵母细胞冷冻保存液及冷冻保存方法。它涉及一种卵母细胞冷冻保存液及冷冻保存方法。本发明解决了现有卵母细胞冷冻保存解冻后存活率及发育率低的问题。卵母细胞冷冻采用cryoloop为载体,以常规培养液为基质,以DMSO和乙二醇为冷冻保护剂,冷冻、解冻过程中添加维生素B12和叶酸。本发明可有效提高解冻后卵母细胞存活率和体外发育率。
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