[发明专利]快速低成本制备DNA Ladder的方法在审
| 申请号： | 201510265744.0 | 申请日： | 2015-05-24 |
| 公开（公告）号： | CN104988134A | 公开（公告）日： | 2015-10-21 |
| 发明（设计）人： | 李小冬;于二汝;舒健虹;王小利;莫本田;蔡一鸣;吴佳海 | 申请（专利权）人： | 贵州省草业研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 李亮;程新敏 |
| 地址： | 550006 贵州省贵阳市小*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种快速低成本制备DNA Ladder的方法。本发明通过PCR扩增的方法获得DNA Ladder所需要的条带，所有条带的大小和浓度都可以精确控制，不受传统方法（如EcoR I 酶切λ DNA）受酶切位点和质粒浓度的限制，生产成本能降低90%；再通过将含有目标大小片段构建到pMD18-T载体上，利用载体上的通用引物分别对每个片段进行PCR扩增，DNA ladder的每一个DNA片段再按照设计好浓度进行稀释与混合，最终快速廉价的制备大小、浓度均可控的DNA ladder。解决了传统酶切方法成本高、获得DNA片段大小与浓度不可控制的难题。而采用本发明方法制造的DNA ladder清晰度与指示效果与商用DNA ladder基本相当，可以代替商用DNA ladder使用。 | ||
| 搜索关键词： | 快速 低成本 制备 dna ladder 方法 | ||
【主权项】：
一种快速低成本制备DNA Ladder的方法，其特征在于：根据DNA Ladder所需要的条带大小，从已知基因组序列中选取目标大小的DNA序列，采用设计好的引物进行PCR进行扩增，切胶回收后将不同大小的条带分别构建到pMD18‑T载体，并提取质粒，获得各个片段的模板；采用载体上公用引物大量扩增获得个目的片段，测定其浓度，按照设计好的浓度进行混合与稀释，得到最终DNA ladder。
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