[发明专利]一种鉴定蓝莓耐热品种的标记基因及其应用

摘要

本发明涉及一种鉴定蓝莓耐热品种的标记基因及其应用，属于植物生物技术领域。利用该标记基因，即o‑型硫氧还蛋白（TRXo），能够在高温胁迫下的不同耐热性蓝莓品种中上调表达且程度不同的特性。以该基因CDS序列为模板设计引物，检测方法人工模拟气候45℃热胁迫处理蓝莓6 h，并提取总RNA，逆转录成cDNA作为模板，进行qRT‑PCR检测，并用2‑ΔΔCt法进行计算分析。通过分析该基因在热胁迫和对照下的表达量的比值，若比值大于等于5，该蓝莓品种可鉴定为耐热品种。该方法相较于田间自然鉴定法更快捷、稳定和准确，是快速筛选耐热品种进行推广种植和耐热新品种育种的基础。

主权项

一种鉴定蓝莓耐热品种的标记基因的应用，其特征在于，人工模拟气候45℃热胁迫处理待检测蓝莓6 h，并提取总RNA，逆转录成cDNA 作为模板；以GAPDH为内参基因，其引物序列为SEQ ID No.4 和SEQ ID No.5，以SEQ ID No.2 和SEQ ID No.3所示序列为引物，进行qRT‑PCR 鉴定，qRT‑PCR 反应体系如下：SEQ ID No.2/ SEQ ID No.4 10 μM                 0.4 μLSEQ ID No.3/ SEQ ID No.5 10 μM                 0.4 μLcDNA 模板                                      1.0 μL2× Premix Ex Taq Ⅱ Tli ENaseH Plus, ROX plus 10 μLddH2O                                          8.2 μL反应条件：95℃ 30 s ； 95℃ 5 s，58℃ 35 s，总共40 个循环，进行qRT‑PCR 检测，并使用2‑ΔΔCt法进行计算分析；以在适宜温度栽培条件下的蓝莓为对照，45℃高温胁迫6 h的蓝莓为待检测材料，提取两者叶片总RNA，并反转录得到cDNA，以此为模板，以鉴定蓝莓耐热品种的标记基因特异序列片段为引物，以GAPDH为内参基因，进行qRT‑PCR 检测，并使用2‑ΔΔCt法进行计算分析；如果鉴定蓝莓耐热品种的标记基因o‑型硫氧还蛋白的表达模式在待检测品种中为上调表达，且表达倍数大于等于5，则表明该蓝莓品种为耐热品种。