[发明专利]一种牛AGPAT6基因单核苷酸多态性的检测方法有效
| 申请号： | 201510195275.X | 申请日： | 2015-04-23 |
| 公开（公告）号： | CN104745716B | 公开（公告）日： | 2017-03-01 |
| 发明（设计）人： | 龙小娟;芦春艳;赵志辉;杨润军 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 长春市四环专利事务所(普通合伙)22103 | 代理人： | 鞠传龙 |
| 地址： | 130012 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种牛AGPAT6基因单核苷酸多态性的检测方法，其方法为第一步、用牛的全血进行全基因组DNA提取；第二步、以提取的全基因组DNA为模板，分别以引物对A、B为引物，PCR扩增牛AGPAT6基因；第三步、用PCR混合产物测序，找出SNP位点；第四步、用限制性内切酶对PCR产物进行酶切；第五步、将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，然后根据电泳条带判定其多态性。有益效果本发明利用PCR‑RFLP技术对牛AGPAT6基因第1外显子的303bp处的T>C单核苷酸多态性和第12外显子的299bp处的G>A单核苷酸多态性进行检测。提供了一种低成本、简单、精准、便于推广应用的在DNA水平上筛查和检测与牛肉质性状和胴体性状密切相关的遗传标记，可用于牛的辅助选择和分子育种。 | ||
| 搜索关键词： | 种牛 agpat6 基因 核苷酸 多态性 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种牛AGPAT6基因单核苷酸多态性的检测方法，其特征在于：其检测方法如下所述：第一步、用牛的全血进行全基因组DNA提取；第二步、以提取的全基因组DNA为模板，分别以引物对A、B为引物，PCR扩增牛AGPAT6基因；所述引物对A为：上游引物：5'TGGCAATGACAGACCTTCAGGAC 3'下游引物：5'CAGGAGGCTGACAATCAGGCTGT 3'所述引物对B为：上游引物：5'CACCTTGTGTCCCTTTCCGC 3'下游引物：5'AGAACAGCACTCCCCTAGCCCT 3'第三步、用PCR混合产物测序，找出SNP位点；第四步、用限制性内切酶BstNI对引物对A的PCR产物进行酶切，用限制性内切酶HhaI对引物对B的PCR产物进行酶切；第五步、将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，然后根据电泳条带判定其多态性：引物对A的PCR产物包含AGPAT6基因第1外显子的303bp处的T>C单核苷酸多态性，酶切后，TT基因型个体表现为139bp，102bp，61bp和48bp条带，CC基因型个体表现为163bp，139bp，61bp和48bp条带，TC基因型个体表现为163bp，139bp，102bp，61bp和48bp条带；引物对B的PCR产物包含AGPAT6基因第12外显子的299bp处的G>A单核苷酸多态性，用限制性内切酶HhaI对引物对B的PCR产物进行酶切后，GG基因型个体表现为119bp，58bp和62bp条带，AA基因型个体表现为177bp，118bp，58bp，和62bp条带。
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