[发明专利]一套早期检测苹果果实内潜伏轮纹病菌的组织学方法

摘要

本发明公开了一套早期检测苹果果实内潜伏轮纹病菌的组织学方法，涉及植物组织内病原菌检测领域。本方法适用于调查苹果果实内潜带轮纹病菌的皮孔数量。具体方法为：对于欲检测的苹果果实或果实组织在不低于100℃的温度蒸煮10分钟以上，剥取表皮；剥取的表皮经1%~15%的次氯酸钠透明5~20分钟，1%~30%氢氧化钾或氢氧化钠浸泡3~5分钟，0.1%~3%的苯胺蓝水溶液染色3~5分钟，用20%~80%的甘油作浮载剂制作临时玻片；在荧光显微镜下用315nm~400nm间的紫外光照谢，观测皮孔内面有无被木栓化组织包被的菌丝，从而判定皮孔是否被轮纹病菌侵染。本发明解决果实轮纹病研究中难以及时检测轮纹病菌侵染量问题，为轮纹病菌侵染量的早期检测提供一套简便、可靠的技术方法。

主权项

1.一套早期检测苹果果实内潜伏轮纹病菌的组织学方法，其特征在于：对于欲检测的苹果果实或果实组织先进行高温蒸煮处理，剥取表皮；剥取的表皮经次氯酸钠透明、强碱浸泡、苯胺监染色后，制作临时玻片；在荧光显微镜下经紫外光激发后，观测果实表皮内侧皮孔内有无被木栓化组织包被的菌丝，从而判定皮孔是否被轮纹病菌侵染，带菌皮孔的数量或百分率，就是病原菌的侵染量；所述高温蒸煮是用不低于100℃的温度对苹果果实或果实组织蒸煮10分钟以上，实验室常用121℃的高温蒸煮20分钟；所述次氯酸钠透明为是将剥取的果实表皮转入含氯量1%~15%的次氯酸钠（NaClO₃）溶液中，透明5~20分钟，直到果皮完全透明后，再用蒸馏水漂洗2~3分钟；次氯酸钠溶液的常用浓度为12%；所述强碱浸泡是把透明的表皮转入1%~30%的氢氧化钾（KOH）或氢氧化钠（NaOH）水溶液中，浸泡3~5分钟，再用蒸馏水漂洗2~3分钟；氢氧化钾或氢氧化钠水溶液的常用浓度为10%；所述苯胺蓝染色是将强碱处理后的果实表皮转入0.1%~3%的苯胺蓝（Aniline blue）水溶液中，染色3~5分钟，用蒸馏水漂洗1~2分钟；苯胺蓝水溶液的常用浓度为0.5%；所述制作临时玻片是将染色的果实表皮转到栽玻片上，摆放整齐，滴加2~3滴20%~80%的甘油水溶液作浮载剂，盖上盖玻片，制作临时玻片；常用甘油水溶液的浓度为50%；所述紫外光激发是用波长315nm~400nm间的紫外光照谢；所述被木栓化组织包被的菌丝是指轮纹病菌侵入果实的皮孔后，刺激皮孔内的薄壁细胞木栓化，并包被在菌丝周围，抑制菌丝生长；经紫外光激发后，在荧光显微镜下菌丝发黄绿荧光，木栓化的组织发出蓝色荧光，结构明显，清晰可见。