[发明专利]多重RNA向导的基因组工程在审
申请号: | 201480048643.1 | 申请日: | 2014-07-08 |
公开(公告)号: | CN105518144A | 公开(公告)日: | 2016-04-20 |
发明(设计)人: | 乔治·M·丘奇;詹姆士·迪卡洛 | 申请(专利权)人: | 哈佛大学校长及研究员协会 |
主分类号: | C12N15/63 | 分类号: | C12N15/63;C12N15/10;C12N15/09 |
代理公司: | 北京康信知识产权代理有限责任公司 11240 | 代理人: | 张英;宫传芝 |
地址: | 美国马*** | 国省代码: | 美国;US |
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摘要: | 本发明提供了在细胞中使用Cas9的多重基因组工程的方法,包括将编码与靶DNA互补的一种或多种RNA的第一外来核酸引入至细胞中并且该第一外来核酸向导酶至靶DNA的循环步骤,其中,该一种或多种RNA和该酶是用于靶DNA的共定位复合物的成员,以及将编码一种或多种供体核酸序列的第二外来核酸引入至细胞中,并且其中为了细胞中的多重DNA工程将循环重复期望的次数。 | ||
搜索关键词: | 多重 rna 向导 基因组 工程 | ||
【主权项】:
一种在表达酶的细胞中对靶DNA进行多重改变的方法,所述酶同与所述靶DNA互补的RNA形成共定位复合物并以位点特异性方式切割所述靶DNA,所述方法包括:(a)将编码与所述靶DNA互补的一种或多种RNA的第一外来核酸引入至所述细胞中,并且所述第一外来核酸向导所述酶至所述靶DNA,其中所述一种或多种RNA和所述酶是用于所述靶DNA的共定位复合物的成员,将编码一种或多种供体核酸序列的第二外来核酸引入至所述细胞中,其中,表达所述一种或多种RNA以及所述一种或多种供体核酸序列,其中,所述一种或多种RNA和所述酶共定位至所述靶DNA,所述酶切割所述靶DNA并且将所述供体核酸插入至所述靶DNA以在所述细胞中产生改变的DNA,以及将步骤(a)重复多次以在所述细胞中对于所述DNA产生多重改变。
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