[发明专利]通过茎环结构阻断3’DNA末端的聚合酶延伸的方法

摘要

提供了用于阻断扩增子3’末端的聚合酶延伸的方法和组合物。

主权项

1.一种引物延伸产物所致假启动减少的进行引物延伸的方法，所述方法包括提供包含以下组分的反应混合物：包含5’末端和3’末端的单链多核苷酸模板，所述多核苷酸模板在3’末端的6个核苷酸内包含5‑25个核苷酸的双链茎，其中：所述双链茎包含3’端并且连接到所述茎的3’端是1‑5个核苷酸，这些核苷酸不构成所述茎的部分并且位于所述多核苷酸模板的3’末端，或由多核苷酸模板中的核苷酸序列形成所述双链茎的第一条链，所述茎的第二条链是与之区分的与所述核苷酸序列互补的反义寡核苷酸，并且所述反义寡核苷酸不包含3’OH部分或者经阻断而不被聚合酶延伸；引物，当所述多核苷酸模板中存在靶序列则所述引物与所述靶系列退火结合；和聚合酶；将所述反应混合物暴露于这样的条件即所述条件下，当所述靶序列存在则所述引物与所述靶序列退火且所述聚合酶以模板依赖的方式延伸所述引物；并且检测引物延伸产物的存在或量。