[发明专利]一种蛹虫草多肽的制备方法

摘要

本发明公开了一种蛹虫草多肽及其生产方法。经过蛹虫草蛋白的提取、蛹虫草提取剩余物多肽提取、活性炭脱色、多肽的分离纯化等工艺步骤制成。本发明以文以蛹虫草提取剩余物为原料，采用酶解法酶解蛹虫草提取剩余物制备多肽，然后用活性炭对蛹虫草HWM剩余物酶解液进行脱色，最后采用葡聚糖凝胶层析对蛹虫草多肽进行分离纯化。

主权项

一种蛹虫草多肽的制备方法，其特征在于：主要工艺流程为：蛹虫草蛋白的提取、蛹虫草提取剩余物多肽提取、活性炭脱色、多肽的分离纯化，具体操作方法依次按下列步骤：（1）蛹虫草蛋白的提取：分别取蛹虫草子座干粉1g于锥形瓶中，加少量蒸馏水，经超声波破碎2h，补加蒸馏水调节料液比为1g:20mL，分别在0.05‑0.30mol/L的氢氧化钠溶液中，在60℃条件下恒温提取3h；提取结束后，在4000r/min离心15min，离心3次，取上清液，制得蛹虫草蛋白；（2）蛹虫草提取剩余物多肽提取：取蛹虫草剩余物1.0g于锥形瓶中，加入蒸馏水调节底物质量浓度为20.0‑100.0mg/mL，用1mol/L盐酸调节溶液pH值至6.5，加入0.01g蜗牛酶，37℃水解3h后，煮沸10min使酶灭活；冷却后，用1mol/L氢氧化钠重新调节溶液pH至8.0‑12.0，加入碱性蛋白酶2‑10%，40‑70℃水解5‑20h，水解结束，沸水浴10min终止酶解反应，抽滤，滤渣烘干至恒重，制得蛹虫草剩余物酶解液；（3）活性炭脱色：精确量取30mL蛹虫草剩余物酶解液于锥形瓶中，用1mol/L的盐酸调节溶液pH值为3.0‑9.0，分别加入0.1‑1.1%的活性炭，20‑45℃条件下脱色15‑75min；脱色结束后，4000r/min离心10min，取上清液在450nm处测定其吸光值；（4）多肽的分离纯化：取等体积的SephadexG‑25或SephadexG‑15凝胶装柱，以1.0mL上样量上柱，在1.0mL/min流速下用蒸馏水进行洗脱，洗脱过程中采用部分收集器收集多肽流出液，制得蛹虫草多肽。