[发明专利]一种鉴别日本乙型脑炎病毒基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的RT-LAMP方法

摘要

本发明公开了一种鉴别日本乙型脑炎病毒基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的RT-LAMP方法。通过对基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本乙型脑炎病毒核苷酸序列的比对分析，针对靶基因上6个区域分别设计了4条特异性引物用于特异性扩增基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本乙型脑炎病毒核酸，在反应体系中加入钙黄绿素荧光染料后可根据反应结束时反应管内液体的颜色变化判定反应结果，同时可根据反应结束后反应管内是否有沉淀及电泳是否出现梯状条带判定反应结果。该方法可在恒温的条件下，1h内实现反转录和核酸扩增，可在1h内快速检测并鉴别基因Ⅰ型和基因Ⅲ型日本乙型脑炎病毒。

主权项

一种鉴别日本乙型脑炎病毒基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的RT‑LAMP方法，其特征在于，该鉴别日本乙型脑炎病毒基因Ⅰ型和基因Ⅲ型的RT‑LAMP方法包含基因Ⅰ型特异性RT‑LAMP引物组：基因Ⅰ型‑F3、基因Ⅰ型‑B3、基因Ⅰ型‑FIP和基因Ⅰ型‑BIP；基因Ⅲ型特异性RT‑LAMP引物组：基因Ⅲ型‑F3、基因Ⅲ型‑B3、基因Ⅲ型‑FIP和基因Ⅲ型‑BIP；基因Ⅰ型和基因Ⅲ型特异性RT‑LAMP引物组序列如下：基因Ⅰ型‑F3：5ˊ‑GGACATTGCGGACGTCAT‑3ˊ；基因Ⅰ型‑B3：5ˊ‑ATTGTCGCACCAGCAGTC‑3ˊ；基因Ⅰ型‑FIP：5ˊ‑TGCTCGGACCCAACATCTGTTTTGTGATCCCCACCTCAAAAGGT‑3ˊ；基因Ⅰ型‑BIP：5ˊ‑YRAATGTCCGAAGCTTGCCGTTGTCTTCCGGATCGTTGCC‑3ˊ；基因Ⅲ型‑F3：5ˊ‑CTTGTGCAGGAGCCATGAA‑3ˊ；基因Ⅲ型‑B3：5ˊ‑TTGCCCATGGTAAGCTTAGG‑3ˊ；基因Ⅲ型‑FIP：5ˊ‑ACGTCTGCAATGTCCGTGTTGTTTGTTGTCGAATTTCCAGGGG‑3ˊ；基因Ⅲ型‑BIP：5ˊ‑AGAGAACAGATGCTGGTTCCGGTTTTCCTCACACATGTAGCCG‑3ˊ。