[发明专利]一种生物相容性量子点的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及一种生物相容性量子点的制备方法及其应用，属于细胞标记技术领域，本发明的技术方案是：本发明首先采用水相法合成硒化镉(CdSe)，通过在CdSe表面生长硫化锌(ZnS)，制备出细胞毒性小的CdSe/ZnS核壳型QDs。合成两性聚合物，然后将两性聚合物与CdSe/ZnS偶联，得到水溶性强、生物相容性好的CdSe/ZnS-Polymer。由于偶联两性聚合物后的QDs具有水溶性强、生物相容性好，使用其对活细胞进行荧光标记并进行体内示踪成为可能。使用该生物相容性QDs进行干细胞标记，对QDs在体内的分布进行荧光成像，增强了荧光信号，提高了观察灵敏度。

主权项

一种生物相容性量子点的制备方法，具体步骤如下：A、合成CdSe：氮气保护下，39.5mg‑158mg硒粉，溶解于50mL液体石蜡中，温度逐渐增加到200℃；剧烈搅拌1小时后，Se混合物冷却致100℃；将0.32g‑1.28g CdO和2.85g‑11.4g硬脂酸溶解在5ml液体石蜡中，氮气保护下160℃搅拌，得到硬脂酸混合物；当硬脂酸混合物变成亮黄色时，迅速注入Se混合物并迅速增加混合物温度至200℃；90分钟后，反应物的温度降低到60℃，添加50mL氯仿至彻底混合；然后将反应物离心8000转/分钟10分钟，弃上清液；添加50mL的乙醇混合均匀；再次离心后，乙醇再次洗涤沉淀；沉淀物烘干后储存于黑暗环境中，得到CdSe；B、合成CdSe/ZnS:在离心管中，2g步骤A得到的CdSe分散在20毫升氯仿中超声1小时；溶液被注入到反应瓶中，保持温度135℃3小时，以完全蒸发氯仿；在另一容器中，45μl‑180μl二乙基锌和41μl‑164μl六甲基二硅硫烷添加到2.5mL三正辛基氧化磷TOPO中混合均匀；温度达到180℃后，将其慢慢注入反应瓶；添加完成后，溶液温度降低到90℃继续搅拌数小时；加入5mL氯仿防止TOPO固化；冷却到室温，反应混合物在10mL氯仿中重新溶解，转移到离心管，加入同等体积的乙醇5000rpm/min×10min离心两次，烘干并定量；加入10ml去离子水防止氯仿蒸发，得到CdSe/ZnS；C、合成两性聚合物：室温下，将0.2g聚丙烯酸MW 1,800添加到一个含10毫升N,N‑二甲基甲酰胺的烧瓶中；搅拌1小时，加入137μl辛胺，搅拌30分钟；将0.47g 1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺溶解于0.5毫升DMF后缓慢滴入反应体系，反应过夜以合成两性聚合物；0.25M盐酸滴加到聚合物溶液中，剧烈搅拌，形成不透明乳状的胶体溶液；胶体以8000rpm/min离心10min，去掉上清液，胶状沉淀用0.25M HCl洗涤两次；沉淀物冷冻干燥成白色粉末，即两性聚合物Polymer；D、CdSe/ZnS‑Polymer合成：将0.45mmol两性聚合物粉末在2.0mL MES缓冲液中重悬，将200μl 0.15mmol CdSe/ZnS溶解在两性聚合物溶液中，加入到盛有8ml去离子水的开放容器中；搅拌超声30分钟，直到氯仿完全蒸发；得到的水化胶质用层析法进一步纯化，获得终产物CdSe/ZnS‑Polymer。