[发明专利]一种凝血酶的制备方法

摘要

本发明涉及一种凝血酶的制备方法，其包括：过滤除去猪血浆中的杂质；加入病毒灭活试剂进行病毒灭活处理；加入吸附剂吸附凝血酶原；洗涤和浸泡吸附凝血酶原的吸附剂，再进行透析；激活经透析的溶液中的凝血酶原；将溶液的pH调节至5.2-5.6，静置后离心，将上清液的pH调节至6.0-6.5，静置；通过膜吸附器后，洗脱得到洗脱液；经超滤膜过滤；经滤膜过滤除菌，再经孔径为20nm的过滤器过滤除去病毒；制成制剂。该制备方法在进一步稳定凝血酶产品的效价的基础上，更有效地减少了凝血酶产品中的杂质及降低杂蛋白浓度，并使病毒充分灭活后被除去。

主权项

一种凝血酶的制备方法，该制备方法包括以下步骤：(1)过滤除去猪血浆中的杂质；(2)向步骤(1)得到的过滤的猪血浆加入病毒灭活试剂，进行病毒灭活处理；(3)向步骤(2)得到的经病毒灭活处理的猪血浆加入吸附剂，吸附凝血酶原，抽滤；(4)以包含11.7克/升氯化钠、3克/升柠檬酸三钠的水溶液洗涤步骤(3)得到的吸附凝血酶原的吸附剂；(5)将步骤(4)得到的吸附凝血酶原的吸附剂浸泡于包含117克/升氯化钠、3克/升柠檬酸三钠的水溶液中，抽滤；(6)将步骤(5)得到的滤液置于2.94克/升柠檬酸三钠水溶液中，进行透析；(7)将步骤(6)得到的经透析的溶液加热至33‑36℃，加入体积比为7％的溶液A，再加入体积比为7％的溶液B和体积比为7％的溶液C，搅拌后静置；其中，所述溶液A为以35克/升的浓度将氯化钙溶于9克/升的NaCl水溶液并经加热搅拌后离心得到的上清液；溶液B为向步骤(6)得到的经透析的溶液加入体积比为7％的溶液A并搅拌后，加入体积比为7％的1摩尔/升的氯化钙水溶液制得的溶液；溶液C为1摩尔/升的氯化钙水溶液；(8)将步骤(7)得到的溶液的pH调节至5.2‑5.6，静置后离心，将上清液的pH调节至6.0‑6.5，静置；(9)将步骤(8)得到的上清液通过膜吸附器后，洗脱得到洗脱液。(10)将步骤(9)得到的洗脱液经超滤膜过滤；(11)将步骤(10)得到的滤液经滤膜过滤除菌，再经孔径为20nm的过滤器过滤除去病毒；(12)将步骤(11)得到溶液制成制剂。