[发明专利]甘露糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法

摘要

本发明公开了甘露糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法。以甘露糖为原料，合成了一系列不同结构的甘露糖衍生物阳离子脂质：di‑C₁₂‑Man‑TMA、di‑C₁₄‑Man‑TMA、di‑C₁₆‑Man‑TMA、di‑C₁₈‑Man‑TMA、Man‑DiC₁₂MA、Man‑DiC₁₄MA、Man‑DiC₁₆MA和Man‑DiC₁₈MA。上述脂质体经水分散后得到一系列具有结构稳定性好、粒度尺寸适中、粒径分布窄、表面电荷适中、制备成本低廉的甘露糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒，能实现核酸药物从胞外到胞内的转运，亦可用于非核酸药物的转运载体。

主权项

1.一系列甘露糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒的制备方法，其特征在于该制备方法包括如下步骤：(1)以甘露糖为原料，高氯酸为催化剂，乙酸酐为反应溶剂及酰化试剂，进行乙酰化反应，经柱层析分离纯化得到棕黄色浆状物1,2,3,4,6‑五‑O‑乙酰基‑α,β‑D‑吡喃甘露糖；(2)以1,4‑二氧六环和甲醇为反应混合溶剂，1,2,3,4,6‑五‑O‑乙酰基‑α,β‑D‑吡喃甘露糖与氨气发生反应，选择性脱1位乙酰基，经柱层析分离纯化得到棕黄色浆状物2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α,β‑D‑吡喃甘露糖；(3)以无水二氯甲烷为溶剂，无水碳酸钾提供弱碱性环境，2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α,β‑D‑吡喃甘露糖与三氯乙腈发生施密特反应，经经柱层析分离纯化得到无色浆状物2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α‑D‑吡喃甘露糖三氯乙酰亚胺酯；(4)以二氯甲烷为反应溶剂，三氟甲磺酸三甲基硅醋(简称：TMSOTOf)为催化剂，步骤(3)所得无色浆状物2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α‑D‑吡喃甘露糖三氯乙酰亚胺酯与3‑氯‑1‑丙醇发生糖苷化反应，经柱层析分离纯化得到无色浆状物3’‑氯丙基2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷；(5)以N,N‑二甲基甲酰胺为反应溶剂，3’‑氯丙基2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷与叠氮化钠反应，经柱层析分离纯化得到无色浆状物3’‑叠氮基丙基2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷；(6)以甲醇为反应溶剂，3’‑叠氮基丙基2,3,4,6‑四‑O‑乙酰基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷与氨气反应脱全部乙酰基，经柱层析分离纯化得到无色浆状物3’‑叠氮基丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷；(7)以N,N‑二甲基甲酰胺为反应溶剂，浓硫酸为催化剂，步骤(6)得到的无色浆状物3’‑叠氮基丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷与苯甲醛室温下反应，经相应的分离纯化处理得到无色浆状物3’‑叠氮基丙基4,6‑O‑苄叉基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷；(8)以N,N‑二甲基甲酰胺为反应溶剂，氢化钠为催化剂，3’‑叠氮基丙基4,6‑O‑苄叉基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷分别与月桂基溴、肉豆蔻基溴、鲸蜡基溴和硬脂基溴反应，经柱层析分离纯化得到3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十二烷基‑4,6‑O‑苄叉基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十四烷基‑4,6‑O‑苄叉基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十六烷基‑4,6‑O‑苄叉基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷和3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十八烷基‑4,6‑O‑苄叉基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷；(9)以甲醇为反应溶剂，3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十二烷基‑4,6‑O‑苄叉基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十四烷基‑4,6‑O‑苄叉基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十六烷基‑4,6‑O‑苄叉基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷和3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十八烷基‑4,6‑O‑苄叉基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷分别与三氟乙酸反应脱去苄叉基，经柱层析分离纯化得到3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十二烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十四烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十六烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷和3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十八烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷；(10)以甲醇为反应溶剂，钯碳为催化剂，3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十二烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十四烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十六烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷和3’‑叠氮基丙基2,3‑二‑O‑正十八烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷分别与甲醛和氢气反应得到叔胺，经相应的分离纯化处理得到无色浆状液体3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十二烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十四烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十六烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷和3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十八烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷；(11)步骤(10)得到的3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十二烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十四烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十六烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷和3’‑N,N‑二甲胺基丙基2,3‑二‑O‑正十八烷基‑α‑D‑吡喃甘露糖苷分别与碘甲烷进行季铵盐化反应，经相应的分离纯化处理得淡黄色或白色固体；(12)以四氢呋喃和水为反应混合溶剂，用三苯基膦还原步骤(6)得到的3’‑叠氮基丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷的叠氮基为伯胺，经相应的分离纯化处理得灰色浆状液体3’‑氨基丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷；(13)以甲醇和乙醇为反应混合溶剂，无水碳酸钾提供碱性环境，在加热的条件下，步骤(12)得到的3’‑氨基丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷分别与月桂基溴、肉豆蔻基溴、鲸蜡基溴和硬脂基溴反应，经相应的分离纯化处理得棕黄色浆状液体3’‑(N,N‑二正十二烷基)丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑(N,N‑二正十四烷基)丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑(N,N‑二正十六烷基)丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷和3’‑(N,N‑二正十八烷基)丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷；(14)以四氢呋喃为反应溶剂，步骤(13)得到的3’‑(N,N‑二正十二烷基)丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑(N,N‑二正十四烷基)丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑(N,N‑二正十六烷基)丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷和3’‑(N,N‑二正十八烷基)丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷分别与碘甲烷进行季铵盐化反应，经相应的分离纯化处理得棕黄色或白色粉末状固体3’‑(N‑甲基‑N,N‑二正十二烷基碘化铵基)丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑(N‑甲基‑N,N‑二正十四烷基碘化铵基)丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷、3’‑(N‑甲基‑N,N‑二正十六烷基碘化铵基)丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷和3’‑(N‑甲基‑N,N‑二正十八烷基碘化铵基)丙基α‑D‑吡喃甘露糖苷；(15)步骤(11)和步骤(14)得到的固体经超声波振荡水分散后得到相应的甘露糖衍生物阳离子脂质体纳米颗粒。