[发明专利]兔白介素 1 β重组蛋白的制备方法在审
| 申请号： | 201410529417.7 | 申请日： | 2014-10-09 |
| 公开（公告）号： | CN104357473A | 公开（公告）日： | 2015-02-18 |
| 发明（设计）人： | 陈金文;李文静;张文文;陈凌燕;路雅丽;姜自彬 | 申请（专利权）人： | 烟台基诺莱斯生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C07K14/545 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 王澎 |
| 地址： | 264000 山东省烟台市高*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种兔白介素1beta(IL-1β)重组蛋白的制备方法，属于分子生物领域。本发明的制备兔白介素1β的方法，包括以下步骤：1)引物设计：引物序列如SEQ ID NO：2-3所示；2)PCR扩增，获得扩增产物；3)重组质粒的构建；4)蛋白的诱导表达；5)蛋白纯化及蛋白复性。本发明通过基因重组、重组蛋白表达纯化和复性技术获得可溶性兔白介素1β重组蛋白；用重组蛋白免疫母鸡后产生高效价的抗体：血清抗体效价为1：64000，卵黄抗体效价为11.5ng/ml，可见本发明获得的重组蛋白具有理想生物学活性，在国内属首创。 | ||
| 搜索关键词： | 白介素 重组 蛋白 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种制备兔白介素1β重组蛋白的方法，包括以下步骤：1)引物设计：设计并合成扩增兔白介素1β的引物，引物序列如SEQ ID NO：2‑3所示；2)PCR扩增：以含有SEQ ID NO：1所示基因序列的DNA为模板进行PCR扩增，PCR扩增程序为：95℃预变性15min；94℃45s，58℃45s，72℃60s，共30个循环；最后72℃延续10min，获得扩增产物；3)重组质粒的构建：采用内切酶酶切前述扩增产物后连接到同一内切酶酶切的原核表达载体pET32a质粒上，连接产物转化感受态细胞DH5α，筛选重组质粒并测序；4)蛋白的诱导表达：测序正确的重组质粒命名为pET32a‑rabbit IL‑1β，转化感受态细胞BL21，IPTG诱导重组蛋白表达；5)蛋白纯化：菌体裂解后收集包涵体，镍柱纯化后经蛋白复性，获得纯化的兔白介素1β重组蛋白。
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