[发明专利]用于核酸指数式扩增的切口和延长扩增反应

摘要

本发明提供一种扩增双链核酸靶序列的方法，其包含在基本等温的条件下:使包含具有有义链和反义链的双链靶序列的靶DNA分子与正向模板和反向模板接触，其中,i)所述正向模板所包含的核酸序列包含位于3’末端且与所述靶序列反义链的3’末端互补的识别区域、ii)所述反向模板所包含的核苷酸序列包含位于3’末端且与所述靶序列有义链的3'末端互补的识别区域、提供能在所述正向模板的所述切口位点上游、下游或所述切口位点处切口但不能在所述靶序列内切口的第一切口酶；提供能在所述反向模板的所述切口位点上游、下游或所述切口位点处切口但不能在所述靶序列内切口的第二切口酶；和提供DNA聚合酶；从而产生扩增产物。

主权项

1.一种扩增双链核酸靶序列的方法，其包含在基本等温的条件下：a) 使包含具有有义链和反义链的双链靶序列的靶核酸分子与正向模板和反向模板接触，其中i) 所述正向模板所包含的核酸序列包含位于3'末端且与所述靶序列反义链的3'末端互补的识别区域、所述识别区域上游的切口酶结合位点和切口位点、以及所述切口位点上游的稳定区域，其中所述核酸序列中与所述靶反义链的3'末端互补的部分长8至15个核苷酸；ii) 所述反向模板所包含的核苷酸序列包含位于3'末端且与所述靶序列有义链的3'末端互补的识别区域、所述识别区域上游的切口酶结合位点和切口位点、以及所述切口位点上游的稳定区域，其中，所述核酸序列中与所述靶有义链的3'末端互补的部分长8至15个核苷酸；b) 提供能在所述正向模板的所述切口位点上游、下游或所述切口位点处切口但不能在所述靶序列内切口的第一切口酶；c) 提供能在所述反向模板的所述切口位点上游、下游或所述切口位点处切口但不能在所述靶序列内切口的第二切口酶；和d) 提供DNA聚合酶；其中扩增是通过多次如下循环来实施：所述聚合酶沿所述靶序列延长所述正向和反向模板，从而产生双链切口位点，并且所述切口酶在所述切口位点处或所述位点的扩增拷贝处切口，从而产生扩增产物；其中，上述步骤是在实质上等温的条件下实施；其中，不需要在扩增前进行靶序列的变性步骤；其中，所述的稳定区域的GC含量为40‑60%，其中，所述方法用于非诊断目的。