[发明专利]基于高通量基因组测序的绵羊肉和鸭肉混合肉类成分的定量检测方法

摘要

本发明提供了一种混合肉类的定量检测方法，具体地，本发明提供了基于高通量基因组测序的绵羊肉和鸭肉混合肉类成分的定量检测方法，包括文库构建、测序、数据处理、结果判断等主要步骤。本发明提供的方法可用于高通量地定量检测多个绵羊‑鸭混合肉类样品，有结果准确、检验快速、价格低廉等优点。

主权项

1.一种测定混合肉类中绵羊肉和鸭肉成分的定量检测方法，其特征在于，包含以下步骤：(a) 提供一待测样品；(b) 从所述样品中，提取全基因组DNA；(c) 用上一步骤的全基因组DNA，构建PCR‑free文库；(d) 对上一步骤的PCR‑free文库进行测序，从而获得所述待测样品的全基因组DNA读序；(f) 将所述读序与动物全基因组DNA标准序列进行比对，从而获得匹配的读序 ；(g) 计算与所述动物物种全基因组DNA标准序列相匹配的匹配读序的碱基数总长占总读序碱基数长度的百分比，即读序的比对率；(h) 基于所述的读序比对率，根据制作的标准曲线计算所述待测样品中各动物源性成分的含量；并且，在步骤(c)中包括以下步骤：先将所述的全基因组DNA打断为150‑350bp的片段，然后再构建文库；和对于所述的经处理的片段化DNA进行纯化，从而获得大小为200‑300bp的DNA片段；其中，在步骤(h)中，通过与标准曲线的比较及通过拟合公式的计算，得出所述待测样品中动物源性成分的含量；并且，所述的标准曲线包括，绵羊和鸭的2种不同动物的全基因组DNA的“读序比对率－质量含量百分比”标准曲线；并且，所述的绵羊的拟合公式如下式I所示：Y=1.1809X                          (I)式中，Y为绵羊肉的质量百分比，按样本的总质量计算；其中，X为混合肉样本中比对到绵羊染色体基因组的所有读长的碱基数之和/测序中所有读长碱基数的总和；和/或所述的鸭肉的拟合公式如下式II所示：Y’=1.345X’                         (II)式中，Y’为鸭肉的质量百分比，按样本的总质量计算；其中，X’为混合肉样本中比对到鸭染色体基因组的所有读长的碱基数之和/测序中所有读长碱基数的总和。