[发明专利]利用多重PCR技术对食源性致病菌进行高通量快速检测的方法在审
| 申请号： | 201410410218.4 | 申请日： | 2014-08-20 |
| 公开（公告）号： | CN104164510A | 公开（公告）日： | 2014-11-26 |
| 发明（设计）人： | 赵凯;周昌艳;任方方;赵笑;索玉娟;吴洋洋;邵毅;胡瑞丽;沈源源;金晓芬;史斌;宋美萱 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院;上海科立特农产品检测技术服务有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 上海开祺知识产权代理有限公司 31114 | 代理人： | 费开逵 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用多重PCR技术对食源性致病菌进行高通量快速检测的方法，依据四种主要的食源性致病菌沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增多性李斯特菌以及大肠杆菌O157：H7的保守区序列设计出适用于进行多重PCR的引物，用多重PCR技术检测农产品中的主要食源性致病菌，该检测方法特异性好，与8种相似菌种无交叉反应，扩增出的条带清晰，灵敏度也较高，检出限均可以达到103copies/ml，而且快速、方便。本发明设计的引物与多重PCR体系可制成适于快速检测食源性致病菌的试剂盒，利用此试剂盒可以大大地缩短时间，提高检测的效率。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 多重 pcr 技术 食源性 致病菌 进行 通量 快速 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种利用多重PCR技术对食源性致病菌进行高通量快速检测的方法，包括：1)查找食源性致病菌沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增多性李斯特菌和大肠杆菌O157:H7的保守区序列；2)针对待测食源性致病菌分别设计4组上下游引物对；所述4组引物对的序列及相关参数为：![]()
3)进行多重PCR反应；进行所述的多重PCR反应的总体系为25～50μl，其中Tris‑HCl，pH＝8.3，10mM；KCl，50mM；MgSO4，1.5mM；dNTP，0.2μM；步骤2)的4组上下游引物各0.8μM；rTaq酶，2U；模板，0.25μl；余量为灭菌的去离子水；4)将步骤3)的产物用琼脂糖凝胶电泳检测。
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