[发明专利]一种快速检测圆环病毒中具有细胞感染力病毒粒子含量的方法

摘要

本发明涉及一种快速、定量检测圆环病毒中具有细胞感染力病毒粒子含量的方法，属病毒检测技术领域。该方法包括圆环病毒标准质粒构建及检测标准曲线建立，待测病毒与对照病毒在相同条件下感染靶细胞，分别提取待测病毒与对照病毒感染后的病毒基因组，通过荧光定量PCR检测获得待测病毒与对照病毒的相对含量。本方法通过在荧光定量PCR检测步骤之前加入了细胞吸附过程，实现了对有细胞感染力的圆环病毒含量的快速测定。

主权项

一种快速检测具有细胞感染力的圆环病毒含量的方法，包括实时荧光PCR检测猪圆环病毒含量的特异性引物、标准质粒的制备、样品细胞吸附前处理、含量测定，其具体特征如下：(1)、病毒标准质粒构建及检测标准曲线建立采用特异性引物，通过PCR扩增，获得圆环病毒全基因片段，将目的片段连接到克隆载体上，转化到感受态细胞，提取质粒DNA，获得圆环病毒检测用的标准质粒。将制备的标准质粒作10倍梯度稀释，以稀释液为模板，进行荧光定量PCR，采集荧光型号，绘制出实施荧光定量标准曲线，并获得其产物Tm值。(2)、细胞吸附取一定量的待检病毒与敏感细胞进行充分吸附，用缓冲液对细胞进行清洗，将未吸附上的病毒粒子从细胞上充分洗脱。(3)、具有细胞感染力病毒粒子含量的测定将病毒原液和吸附了病毒的细胞进行核酸提取，通过实时荧光PCR对吸附进细胞中的病毒的进行检测，通过标准曲线进行相对定量。