[发明专利]一种利用木糖产聚羟基烷酸酯菌群的筛选和驯化方法

摘要

本发明提供了一种利用木糖产聚羟基烷酸酯菌群的筛选和驯化方法，一步获得利用木糖产PHA混合菌群。借鉴PHA合成菌群的饱食饥饿驯化模式，污泥样以木糖为唯一碳源进行驯化，驯化过程中同时进行聚羟基烷酸酯合成菌群的尼罗蓝染色法筛选并回注到木糖驯化的菌群中。最终获得稳定高产PHA的混合菌群，该混合菌群体系中主要存在γ‑Proteobacteria、Cellvibrio sp.、Uncultured bacterium和Pseudomonas putida4种优势菌株。该方法简单有效，驯化时间短，所得菌群具有较强利用木糖产PHA的能力，对实现以纤维素基原料发酵生产PHA具有重大意义和实用价值。

主权项

一种利用木糖产聚羟基烷酸酯菌群的筛选和驯化方法，其特征是：以富含混合菌群的活性污泥为原料，利用混合菌群产PHA的饱食饥饿驯化模式进行驯化；驯化培养基为：木糖1800mg/L，氯化铵170mg/L，磷酸氢二钾90mg/L，磷酸二氢钾35mg/L，硫酸镁600mg/L，EDTA 100mg/L，氯化钙70mg/L，微量元素2mL/L，其中微量元素组成为：六水氯化铁1000mg/L，硼酸150mg/L，六水氯化钴150mg/L，四水氯化锰120mg/L，七水硫酸锌120mg/L，二水钼酸钠60mg/L，五水硫酸铜30mg/L，碘化钾30mg/L；pH 6.6～6.7；驯化模式包括进料、通气、沉降和排水四个步骤为一个培养周期；驯化过程中取样，使用尼罗蓝染色法进行PHA合成菌群的筛选，筛选培养基：蛋白胨10g/L，牛肉膏5g/L，氯化钠2g/L，尼罗蓝终浓度50mg/L，琼脂20g/L；pH 7.5；筛选得到的PHA高产菌群富集培养后回注到正在驯化中的体系中，对驯化中的菌群进行扰动；驯化结束后使用得到的混菌体系进行PHA发酵生产，发酵结束后进行PHA提取。