[发明专利]一种利用SUMO系统表达HMGB1 A-box蛋白的方法有效
| 申请号： | 201410271256.6 | 申请日： | 2014-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN104046646A | 公开（公告）日： | 2014-09-17 |
| 发明（设计）人： | 葛文松;陈颖伟;范建高 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院附属新华医院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/12;C07K14/47 |
| 代理公司： | 上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙) 31262 | 代理人： | 金重庆 |
| 地址： | 200092 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种利用SUMO系统表达HMGB1A-box蛋白的方法，包括以下步骤：以包含HMGB1的质粒为模板，设计引物扩增A-Box结构域，将扩增后的目的基因A-Box亚克隆进pSumo-Mut表达载体的StuI和HindIII之间，获得pSumo-Mut-A-Box质粒；使用重组质粒转化ArcticExpressTM(DE3)原核宿主菌，使用IPTG诱导表达目的蛋白；sumo蛋白酶酶解，获得高纯度的A-Box蛋白。本发明优点在于：应用SUMO表达系统高效稳定、可溶性地表达了HMGB1A-box融合蛋白，经过SUMO蛋白酶I切割后可以获得纯度较高的成熟蛋白，且无氨基酸残基残留。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 利用 sumo 系统 表达 hmgb1 box 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
一种利用SUMO系统表达HMGB1 A‑box蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：a、以包含HMGB1的质粒为模板，设计引物扩增A‑Box结构域，将扩增后的目的基因A‑Box亚克隆进pSumo‑Mut表达载体的Stu I 和Hind III之间，目标基因N端融合了Sumo标签蛋白，获得pSumo‑Mut‑A‑Box质粒；b、使用重组质粒转化ArcticExpressTM (DE3)原核宿主菌，使用IPTG诱导表达目的蛋白，将诱导条件调整至11度，通过Ni亲和纯化获得sumo‑A‑Box融合蛋白；再通过sumo蛋白酶酶解，将sumo融合蛋白与A‑Box分离，再进行Ni柱亲和纯化，去除残留的Sumo‑A‑Box融合蛋白、Sumo融合标签以及sumo蛋白酶，最终获得高纯度的A‑Box蛋白。
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