[发明专利]一种利用SUMO系统表达HMGB1 A-box蛋白的方法有效
| 申请号： | 201410271256.6 | 申请日： | 2014-06-18 |
| 公开（公告）号： | CN104046646A | 公开（公告）日： | 2014-09-17 |
| 发明（设计）人： | 葛文松;陈颖伟;范建高 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院附属新华医院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/12;C07K14/47 |
| 代理公司： | 上海卓阳知识产权代理事务所(普通合伙) 31262 | 代理人： | 金重庆 |
| 地址： | 200092 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 sumo 系统 表达 hmgb1 box 蛋白 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用SUMO系统表达HMGB1 A-box蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、以包含HMGB1的质粒为模板，设计引物扩增A-Box结构域，将扩增后的目的基因A-Box亚克隆进pSumo-Mut表达载体的Stu I 和Hind III之间，目标基因N端融合了Sumo标签蛋白，获得pSumo-Mut-A-Box质粒；
b、使用重组质粒转化ArcticExpressTM (DE3)原核宿主菌，使用IPTG诱导表达目的蛋白，将诱导条件调整至11度，通过Ni亲和纯化获得sumo-A-Box融合蛋白；
再通过sumo蛋白酶酶解，将sumo融合蛋白与A-Box分离，再进行Ni柱亲和纯化，去除残留的Sumo-A-Box融合蛋白、Sumo融合标签以及sumo蛋白酶，最终获得高纯度的A-Box蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤a中扩增A-Box结构域的引物序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的步骤a中获得的pSumo-Mut-A-Box序列如SEQ ID NO.3所示。
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