[发明专利]一种用于在米曲霉细胞分泌表达外源蛋白的表达设备及其米曲霉基因工程菌

摘要

本发明提供一种用于在米曲霉细胞分泌表达外源蛋白的表达设备及其米曲霉基因工程菌，该表达设备从5’至3’依次包括(1)控制外源基因在米曲霉中转录的启动子；(2)控制外源蛋白在米曲霉中分泌表达的信号肽的编码序列；(3)用于外源蛋白亲和纯化的标签的编码序列；(4)多克隆位点；(5)控制外源基因在米曲霉中终止转录的终止子；(6)用于质粒转化筛选标记的米曲霉乳清酸磷酸核糖转移酶基因的表达盒，其编码序列如SEQ ID2所示。该表达设备利用营养缺陷型基因筛选标记，提高转化阳性率，缩短操作时间和工作量，适合大多数外源基因的分泌表达；该米曲霉基因工程菌可高效表达酸性、中性淀粉酶，在造纸业和纺织业具有重要应用。

主权项

一种表达外源蛋白的米曲霉基因工程菌，其特征在于，所述米曲霉基因工程菌包括宿主菌和表达载体，所述宿主菌是米曲霉尿嘧啶营养缺陷型菌株RIB40‑PF1，该菌株RIB40‑PF1的保藏号为CGMCC NO：9129，所述表达载体从5’至3’依次包括以下元件：(1)控制外源基因在米曲霉中转录的米曲霉α‑淀粉酶启动子，序列如SEQ ID NO:1所示序列的第7位至第623位；(2)控制外源蛋白在米曲霉中分泌表达的信号肽的序列，如SEQ ID NO:1所示序列的第624位至第695位；(3)用于外源蛋白亲和纯化的His‑Tag标签的序列，如SEQ ID NO:1所示序列的第696位至第713位；(4)多克隆位点，序列如SEQ ID NO:1所示序列的第714位至第784位；(5)控制外源基因在米曲霉中终止转录的米曲霉α‑淀粉酶终止子，序列如SEQ ID NO:1所示序列的第785位至第1681位；(6)用于质粒转化筛选标记的米曲霉乳清酸磷酸核糖转移酶基因的表达盒，所述用于质粒转化筛选标记的米曲霉乳清酸磷酸核糖转移酶基因的表达盒的序列如SEQ ID:2所示。