[发明专利]一种双向电泳蛋白质样品的定量方法

摘要

本发明公开了一种双向电泳蛋白质样品的定量方法，包括：双向电泳蛋白样品制备；用双向电泳细胞裂解液配制1-2mg/mL的牛血清白蛋白（BSA）溶液，取8支离心管，分别加入0-200μL牛血清白蛋白溶液，并用超纯水补足至1mL，使标准蛋白的终浓度为0-0.2mg.mL^-1，然后每支离心管中加入0.01%考马斯亮蓝G-250或R-250染液5mL，充分混匀，得不同浓度标准混合溶液；双向电泳蛋白样品混合溶液制备；加样，描并框选荧光强度；绘制标准曲线；计算双向电泳蛋白样品的浓度。本发明操作简单，准确、快速且廉价。

主权项

 一种双向电泳蛋白质样品的定量方法，包括如下步骤：双向电泳蛋白样品制备：取不同来源的生物样品10‑100mg，加1‑5mL双向电泳细胞裂解液，重悬后收集于离心管冰上超声，每次超声10s，暂停10s，共计5个循环；4℃、14000g离心30min，将上清转移至新离心管，分装后‑80℃保存，得双向电泳蛋白样品；（2）用于绘制标准曲线的不同浓度标准混合溶液的制备：用双向电泳细胞裂解液配制1‑2mg/mL的牛血清白蛋白（BSA）溶液，取8支离心管，分别加入0‑200μL牛血清白蛋白溶液，并用超纯水补足至1mL，使标准蛋白的终浓度为0‑0.2mg.mL^‑1，然后每支离心管中加入0.01%考马斯亮蓝G‑250或R‑250染液5mL，充分混匀，得不同浓度标准混合溶液，待测；（3）双向电泳蛋白样品混合溶液制备：取10‑100μL双向电泳蛋白样品加入离心管中，用超纯水补足至1mL，再加入0.01% 考马斯亮蓝G‑250 或R‑250染液5mL，充分混匀，待测；（4）加样：取孔板一块，在各孔中分别加入不同浓度标准混合溶液和双向电泳蛋白样品混合溶液200‑1000μL；（5）扫描并框选荧光强度：加样完成后迅速将孔板去盖后用基因公司LI‑COR的Odyssey近红外荧光成像系统，在680nm通道下扫描成像，并框选荧光区域；（6）绘制标准曲线：记录各孔的荧光强度，以不同浓度标准蛋白混合溶液为横坐标（X），对应的荧光强度为纵坐标（Y），拟合标准曲线的回归方程；（7）计算双向电泳蛋白样品的浓度：将双向电泳蛋白样品混合溶液孔的荧光强度代入回归方程，即可计算出待双向电泳蛋白样品的终浓度，在终浓度基础上乘以相应的稀释倍数即是双向电泳蛋白样品原液的浓度。