[发明专利]一种具有诱导活性微载体-细胞复合物的制备方法及其应用

摘要

一种具有诱导活性微载体-细胞复合物的制备方法及其应用，分别利用脱钙骨基质微颗粒和脱细胞真皮基质微颗粒培养骨髓间充质干细胞7-21天，分化为成骨细胞及成纤维细胞，得到成骨细胞-微颗粒复合物和成纤维细胞-微颗粒复合物，然后充分混匀。制得产品种子细胞活性更高，能够应用于制备治疗腔隙性骨缺损及节段性骨缺损修复材料中，体内修复效果更好，可提高组织工程骨的体内修复效果2倍以上；通过在组织工程骨构建过程中添加支持细胞成分，在体内骨生成中促进成骨实质细胞的成骨效果，其新生骨强度、基质成分含量及钙化程度等均可得到1.5-2倍的提高，明显提高种子细胞利用效率，丰富骨修复种子细胞类型，大范围提高骨缺损修复效果。

主权项

一种具有诱导活性微载体‑细胞复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)脱钙骨基质微颗粒制备:将牛皮质骨进行冷冻粉碎，然后筛选出粒径小于200μm的颗粒，再将筛选出的颗粒进行脱脂及脱钙处理，得到脱钙骨基质微颗粒；2)脱细胞真皮基质微颗粒制备：取全厚皮肤，灭菌后用NaCl溶液浸泡，剥离表皮层后用十二烷基苯磺酸钠溶液浸泡，然后用PBS缓冲液漂洗，用胰蛋白酶溶液浸泡消化后，再用PBS漂洗，然后经冷冻粉碎后筛选出粒径小于200μm的颗粒，将筛选出的颗粒进行冻干处理，得到脱细胞真皮基质微颗粒；3)利用脱钙骨基质微颗粒进行BMSCs培养细胞7‑21天，分化为成骨细胞，得到成骨细胞‑微颗粒复合物；其中，在培养过程中添加促进分化的成骨诱导液，或直接进行已分化细胞的体外培养；在37℃、CO₂体积浓度为5％、饱和湿度的条件下，利用脱细胞真皮基质微颗粒进行BMSCs培养细胞7‑21天，分化为成纤维细胞，得到成纤维细胞‑微颗粒复合物；其中，在培养过程中添加促进分化的成纤维诱导液，或直接进行已分化细胞的体外培养；按质量比(1‑3):1将成骨细胞‑微颗粒复合物和成纤维细胞‑微颗粒复合物充分混匀，得到具有诱导活性微载体‑细胞复合物。