[发明专利]一种利用微生物发酵将剑麻皂苷转化成皂苷元的方法

摘要

本发明公开了一种利用微生物发酵将剑麻皂苷转化成皂苷元的方法。该微生物菌株现保藏于中国武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2013年7月9日，保藏编号：CCTCCM2013322，分类命名：GLHZB22。首先，将该菌株第一次发酵制备发酵用菌，在30℃时发酵扩大培养72小时；其次，取一定量的剑麻残渣热水浸提液，按照一定比例向提取液中接种菌种，并发酵培养，此液体不含皂苷元，培养3-5天后，在液体中能够检测出剑麻皂苷元，说明皂苷上的糖基被该菌株生物降解，同时在发酵液中有皂苷元。本发明方法使用的微生物具有安全环保、成本低、降解速度快、降解率高等特点，能够推广应用于皂苷元工业生产。

主权项

 一种利用微生物发酵将剑麻皂苷转化成皂苷元的方法，其特征在于具体步骤为：(1)制备培养基：a.称取去皮土豆200~250g，并将土豆切成1.8~2.2cm的方块，加0.5~1.5L水后加热煮沸25~35min，之后冷却至室温，用三层纱布过滤，定容滤液至0.5~1.5L，备用；b.取0.1L步骤(1)第a制得的备用滤液置于250ml的三角瓶中，标记为1号备用，用于目的菌株的固体平面培养；取0.2L步骤(1)第a制得的备用滤液置于1L的三角瓶中，标记为2号备用，用于目的菌株的液体扩增培养；(2)目的菌株的固体平面培养：向步骤(1)第b步中标记为1号备用的三角瓶中加入1.5g琼脂粉，用牛皮纸包扎瓶口，在1.103MPa、121℃下灭菌20min，取出后迅速地倒入直径为9cm的培养皿内，加盖，待琼脂凝固后备用，即为固体培养基；在无菌条件下，将斜面保存的目的菌株涂布在固体培养基上，30℃下培养72小时，即完成目的菌株的固体平面培养；(3)目的菌株的液体扩增培养：将步骤(1)第b步中标记为2号备用的三角瓶在1.103MPa、121℃下灭菌20min，冷却后降至室温，然后向其中加入步骤(2)中完成目的菌株固体平面培养的菌落小饼10个，在30℃以200转/分钟的速度摇床振荡培养72小时，即完成目的菌株的液体扩增培养；所述菌落小饼的直径为1cm；(4)目的菌株对底物发酵制得皂苷元：称取剑麻抽丝后的干残渣200g，加入1L自来水，煮沸提取60min后三层纱布过滤，滤液定容至1L，在1.103MPa，121℃下灭菌20min，转入2L玻璃瓶中，在无菌条件下，接入0.1L步骤(3)中完成目的菌株液体扩增培养的的菌液，30℃下以200转/分钟的速度摇床振荡发酵72小时，即制得含有皂苷元的产物；所述目的菌株为有选择性地从土壤样品中筛选的目的菌株，该目的菌株在以剑麻残渣提取液为发酵液的发酵过程中能够降解剑麻皂苷糖基，同时制备出皂苷元，该目的菌株现保藏于中国武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏日期：2013年7月9日，保藏编号：CCTCCM2013322，分类命名：GLHZB22。