[发明专利]用于制备卵黄抗体的大肠杆菌菌毛抗原的提取方法和制备卵黄抗体的方法有效
| 申请号： | 201410217533.5 | 申请日： | 2014-05-22 |
| 公开（公告）号： | CN104017060B | 公开（公告）日： | 2017-01-11 |
| 发明（设计）人： | 陈娟;赵秦;孙盼;柴向东;王荣;刘晓璐;刘超;岳静;孟美玲 | 申请（专利权）人： | 深圳市海王英特龙生物技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/245 | 分类号： | C07K14/245;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/34;C07K16/12;C07K16/02 |
| 代理公司： | 北京律诚同业知识产权代理有限公司11006 | 代理人： | 黄韧敏 |
| 地址： | 518000 广东省深圳市南*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明提供一种用于制备卵黄抗体的大肠杆菌菌毛抗原的提取方法，包括：1)培养大肠杆菌，收集菌体，破碎并溶解菌体，制备含大肠杆菌菌体的初提取液；2)将所述初提取液经4FF凝胶层析柱纯化获得含大肠杆菌菌毛蛋白的纯化液；3)用丙酮沉淀去除大肠杆菌菌毛蛋白的纯化液中的内毒素，获得大肠杆菌菌毛抗原。本发明利用凝胶过滤层析得到了纯度较高的菌毛蛋白，且去除了菌体释放的内毒素等可能干扰免疫效果的因素。制备的亚单位疫苗免疫蛋鸡，成功获得了高效价的抗体，为相关疾病的预防和治疗提供了新思路。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 制备 卵黄 抗体 大肠杆菌 抗原 提取 方法 | ||
【主权项】：
用于制备卵黄抗体的大肠杆菌菌毛抗原的提取方法，包括下述步骤：1)培养大肠杆菌，收集菌体，破碎并溶解菌体，制备含大肠杆菌菌体的初提取液；2)将所述初提取液经4FF凝胶层析柱纯化获得含大肠杆菌菌毛蛋白的纯化液；所述的4FF凝胶层析柱纯化包括：用PBS以8ml/min流速平衡4FF琼脂糖凝胶柱2‑3个体积，同时打开紫外检测仪，待基线稳定后，量取菌毛粗提液上样，上样结束后继续以PBS平衡和洗脱，待紫外检测仪的0.05A值快速上升至50‑100，开始收集蛋白样品，A值回落至100左右停止收集；3)用丙酮沉淀去除大肠杆菌菌毛蛋白的纯化液中的内毒素，获得大肠杆菌菌毛抗原。
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