[发明专利]一种基于CSF-FMD二联基因工程疫苗的制备方法

摘要

本发明涉及一种基于CSF-FMD二联基因工程疫苗的制备方法，公开了基于猪瘟病毒和猪O型口蹄疫病毒二联核酸疫苗的研究及应用。基于猪瘟病毒和猪O型口蹄疫病毒二联核酸疫苗主要原料为：pcDNA3.1-CSFV-E2-FMDV-O-VP1真核质粒。本发明本发明针对CSFVE2基因和FMDV-OVP1进行核酸疫苗研究，可刺激动物机体产生相应高水平的抗体，体现出很强的特异性。针对CSFV和FMDV-O引发猪的感染和传播，通过E2基因和VP1基因对两种病毒起到防控效果，可达到安全和有效的效果。

主权项

一种基于CSF‑FMD二联基因工程疫苗的制备方法，其特征在于：包含以下步骤：（1）猪瘟病毒病料CSFV‑E2的RT‑PCR扩增；猪O型口蹄疫病毒病料FMDV‑O VP1的RT‑PCR扩增；（2）回收RT‑PCR产物，与pMD19‑T载体连接；将连接产物转化入大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞培养，挑取上述转化平皿中的白色菌落，接种到含有氨苄青霉素的2×YT液体培养基中，振荡培养至混浊，提取质粒并进行酶切鉴定，筛选出阳性并进行测序；（3）将所构建重组质粒pMD19‑CSFV‑E2与pcDNA3.1（+）载体分别进行BamH I和EcoR I双酶切，回收纯化目的片段，将二者用T4 DNA连接酶连接，连接产物转化至DH5α感受态细胞，获得阳性重组质粒pcDNA3.1‑CSFV‑E2，利用试剂盒提取质粒，进行BamH I和EcoR I双酶切及PCR鉴定，并送测序验证；（4）将所构建重组质粒pMD19‑FMDV‑O‑VP1与pcDNA3.1‑CSFV‑E2分别进行BamH I和Hind双酶切，回收纯化目的片段，将二者用T4 DNA连接酶连接，连接产物转化至DH5α感受态细胞，获得阳性重组质粒pcDNA3.1‑CSFV‑E2‑FMDV‑O‑VP1，利用试剂盒提取质粒，进行BamH I和Hind双酶切及PCR鉴定，并送公司测序验证。