[发明专利]一种基于CSF-FMD二联基因工程疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种基于CSF-FMD二联基因工程疫苗的制备方法，其特征在于：包含以下步骤：

（1）猪瘟病毒病料CSFV-E2的RT-PCR扩增；猪O型口蹄疫病毒病料FMDV-O VP1的RT-PCR扩增；

（2）回收RT-PCR产物，与pMD19-T载体连接；将连接产物转化入大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞培养，挑取上述转化平皿中的白色菌落，接种到含有氨苄青霉素的2×YT液体培养基中，振荡培养至混浊，提取质粒并进行酶切鉴定，筛选出阳性并进行测序；

（3）将所构建重组质粒pMD19-CSFV-E2与pcDNA3.1（+）载体分别进行BamH I和EcoR I双酶切，回收纯化目的片段，将二者用T4 DNA连接酶连接，连接产物转化至DH5α感受态细胞，获得阳性重组质粒pcDNA3.1-CSFV-E2，利用试剂盒提取质粒，进行BamH I和EcoR I双酶切及PCR鉴定，并送测序验证；

（4）将所构建重组质粒pMD19-FMDV-O-VP1与pcDNA3.1-CSFV-E2分别进行BamH I和Hind                                                双酶切，回收纯化目的片段，将二者用T4 DNA连接酶连接，连接产物转化至DH5α感受态细胞，获得阳性重组质粒pcDNA3.1-CSFV-E2-FMDV-O-VP1，利用试剂盒提取质粒，进行BamH I和Hind 双酶切及PCR鉴定，并送公司测序验证。