[发明专利]通过离体挽救培养获得草莓远缘杂种的方法及培养基

摘要

本发明公开了一种通过离体挽救培养获得草莓远缘杂种的方法及培养基，该技术分别以栽培草莓品种久香、甜查理、丰香为母本或父本，野生黄毛草莓为父本或母本进行杂交，正交与反交同时进行。通过对杂交授粉后的未成熟胚进行离体培养，在胚败育前将其取出进行挽救培养，避免远缘杂种胚的衰亡，使大量远缘杂种胚继续发育成幼苗，并进入选育程序，缩短了育种周期；同时，获得了大量远缘杂交后代，实现了草莓属种间的远缘杂交，创制了一批新种质，有效地缩短了草莓杂交后代的培育周期，杂种胚成苗率可达到91.67％。

主权项

通过离体挽救培养获得草莓远缘杂种的方法，包括以下步骤：1)杂交授粉：以栽培草莓品种和野生草莓品种为杂交亲本进行杂交授粉；2)果实消毒：将授粉后5～35天其种子未完全发育的果实取下，于4℃～7℃存放3～4小时，取大小为1～3厘米的果实，先用70％的酒精表面消毒10～30秒，再用0.1wt％的升汞溶液灭菌1～3分钟，之后用无菌水清洗3～5遍，吸干果实表面水分；3)未成熟胚剥离：在无菌条件下，将灭菌的果实取下种子剥离其幼胚，立即接种于诱导培养基中离体培养，先暗培养7天，再进行光照培养，诱导培养21～28天后获得膨大的胚；光照培养条件为：光照时间10小时/天，光照强度2000～3000Lx，培养温度24±1℃；诱导培养基：1/2MS基本培养基，蔗糖30～50g/L，琼脂6～8g/L，吲哚丁酸IBA0.3～0.5mg/L，pH5.5～5.8；4)胚萌发培养：将膨大的胚剥除胚乳后置于胚萌发培养基中进行挽救培养，培养30～35天后幼胚萌发，光照培养条件同步骤3)；胚萌发培养基：1/2MS基本培养基，蔗糖30～50g/L，琼脂6～8g/L，萘乙酸NAA0.2～0.5mg/L，6‑苄氨基腺嘌呤6‑BA1.2～1.5mg/L，pH5.5～5.8；5)增殖培养：将萌发的幼胚接种至增殖培养基中，光照培养条件和培养基组成与步骤4)相同，每10～15天继代增殖1次，获得芽苗；6)生根培养：将经过1～4次继代增殖培养的芽苗从芽丛中切下，转到生根培养基中促使其生根，生根培养45～60天，得到生根的草莓胚苗，培养温度24±1℃；生根培养基：1/2MS基本培养基，蔗糖30～50g/L，琼脂6～8g/L，吲哚丁酸IBA0.2～0.5mg/L，6‑苄氨基腺嘌呤6‑BA0.02～0.05mg/L，水解酪蛋白LH0.2～0.4g/L，腺嘌呤Ad4～6mg/L，pH5.5～5.8；7)炼苗移栽：开瓶后在瓶底加水，炼苗3～4天，然后将生根苗从培养瓶中取出，清水洗净根系附带的培养基，然后移栽在栽培基质中遮光处理2～3天，在温室中保持相对湿度75％～85％进行炼苗，培养20～30天即可移入大田种植。