[发明专利]通过离体挽救培养获得草莓远缘杂种的方法及培养基

权利要求书

1.通过离体挽救培养获得草莓远缘杂种的方法，包括以下步骤：

1)杂交授粉：以栽培草莓品种和野生草莓品种为杂交亲本进行杂交授粉；

2)果实消毒：将授粉后5～35天其种子未完全发育的果实取下，于4℃～7℃存放3～4小时，取大小为1～3厘米的果实，先用70％的酒精表面消毒10～30秒，再用0.1wt％的升汞溶液灭菌1～3分钟，之后用无菌水清洗3～5遍，吸干果实表面水分；

3)未成熟胚剥离：在无菌条件下，将灭菌的果实取下种子剥离其幼胚，立即接种于诱导培养基中离体培养，先暗培养7天，再进行光照培养，诱导培养21～28天后获得膨大的胚；

光照培养条件为：光照时间10小时/天，光照强度2000～3000Lx，培养温度24±1℃；

诱导培养基：1/2MS基本培养基，蔗糖30～50g/L，琼脂6～8g/L，吲哚丁酸IBA0.3～0.5mg/L，pH5.5～5.8；

4)胚萌发培养：将膨大的胚剥除胚乳后置于胚萌发培养基中进行挽救培养，培养30～35天后幼胚萌发，光照培养条件同步骤3)；

胚萌发培养基：1/2MS基本培养基，蔗糖30～50g/L，琼脂6～8g/L，萘乙酸NAA0.2～0.5mg/L，6-苄氨基腺嘌呤6-BA1.2～1.5mg/L，pH5.5～5.8；

5)增殖培养：将萌发的幼胚接种至增殖培养基中，光照培养条件和培养基组成与步骤4)相同，每10～15天继代增殖1次，获得芽苗；

6)生根培养：将经过1～4次继代增殖培养的芽苗从芽丛中切下，转到生根培养基中促使其生根，生根培养45～60天，得到生根的草莓胚苗，培养温度24±1℃；

生根培养基：1/2MS基本培养基，蔗糖30～50g/L，琼脂6～8g/L，吲哚丁酸IBA0.2～0.5mg/L，6-苄氨基腺嘌呤6-BA0.02～0.05mg/L，水解酪蛋白LH0.2～0.4g/L，腺嘌呤Ad4～6mg/L，pH5.5～5.8；

7)炼苗移栽：开瓶后在瓶底加水，炼苗3～4天，然后将生根苗从培养瓶中取出，清水洗净根系附带的培养基，然后移栽在栽培基质中遮光处理2～3天，在温室中保持相对湿度75％～85％进行炼苗，培养20～30天即可移入大田种植。

2.根据权利要求1所述的通过离体挽救培养获得草莓远缘杂种的方法，其特征在于，步骤7)所述的炼苗移栽过程为：将生根后的草莓胚苗，移栽前将瓶盖打开一条缝，注入10～15毫升无菌水进行自然驯化2～3天，接着完全揭开瓶盖并添加10～15毫升蒸馏水锻炼1天，将生根苗从培养瓶中取出，清水洗净根系附带的培养基，然后移栽在灭菌的栽培基质中遮光遮荫处理2～3天，在温室中保持相对湿度75％～85％进行炼苗，培养20～30天即可移入大田种植。

3.根据权利要求1或2所述的通过离体挽救培养获得草莓远缘杂种的方法，其特征在于，所述的栽培草莓品种为久香、甜查理或丰香，野生草莓品种为野生黄毛草莓。

4.用于离体挽救培养获得草莓远缘杂种的培养基，其包括，诱导培养基、胚萌发培养基和生根培养基，其特征在于，

所述的诱导培养基，其由以下组分组成：1/2MS基本培养基，蔗糖30～50g/L，琼脂6～8g/L，吲哚丁酸IBA0.3～0.5mg/L；

所述的胚萌发培养基，其由以下组分组成：1/2MS基本培养基，蔗糖30g～50g/L，琼脂6g～8g/L，萘乙酸NAA0.2～0.5mg/L，6-苄氨基腺嘌呤6-BA1.2～1.5mg/L；

所述的生根培养基，其由以下组分组成：1/2MS基本培养基，蔗糖30g～50g/L，琼脂6g～8g/L，吲哚丁酸IBA0.2～0.5mg/L，6-苄氨基腺嘌呤6-BA0.02～0.05mg/L，水解酪蛋白LH0.2～0.4g/L，腺嘌呤Ad4～6mg/L。