[发明专利]一种基于分子印迹膜分离发酵耦合制备埃博霉素B的方法

摘要

一种基于分子印迹膜分离发酵耦合制备埃博霉素B的方法，经过前期发酵得到种子培养液，将种子培养液在发酵罐中进行发酵培养，在发酵过程中利用分子印迹膜对发酵液进行过滤，对过滤得到的物质进行洗脱，收集洗脱液，最后进行浓缩得到埃博霉素B。本发明利用发酵罐进行发酵生产埃博霉素B，并将分子印迹膜特异性吸附分离和发酵过程耦合，即在发酵生产埃博霉素B的同时，及时将代谢产物埃博霉素B分离出，使发酵罐中埃博霉素B的浓度维持在较低水平，从而减少反馈抑制和产物毒性，提高发酵产量；同时利用分子印迹膜专一性分离埃博霉素B，而不分离其它成分来降低下游分离纯化成本，有利于发酵液的后处理与产物的精制，在工业界有广阔的应用前景。

主权项

一种基于分子印迹膜分离发酵耦合制备埃博霉素B的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)前期发酵菌种活化：将一支纤维堆囊菌接种到CNST培养基上活化，在培养基上放置灭菌的滤纸片，然后将放置有滤纸片的CNST培养基置于恒温培养箱中于28～32℃下培养5～7d；种子培养：用接种环从CNST培养基上刮取降解了滤纸片的黄色菌落，接种到含有种子培养基的种子瓶中，置于巡回式摇床上，于28～32℃下培养2～3d，得到种子培养液；(2)发酵培养：按每100mL接种5～10mL的比例将种子培养液接种于发酵罐中进行发酵培养，发酵培养温度为28～32℃，搅拌转速为100～150r/min，通气量为2.5～4.5L/min；(3)分子印迹膜过滤除去埃博霉素B：待纤维堆囊菌在发酵罐中发酵72～120h后，将发酵罐中的发酵液持续通入到装有分子印迹膜的第一过滤装置中，进行过滤以分离出埃博霉素B，除去埃博霉素B的发酵液返回到发酵罐中继续发酵；(4)补料：在发酵过程中，将灭菌的新鲜培养基加入到发酵罐中；(5)埃博霉素B洗脱分离：发酵96～144h之后，对第一分离装置中分离出的埃博霉素B进行洗脱，并收集洗脱液，同时将发酵罐中的发酵液通入到装有分子印迹膜的第二过滤装置中，进行过滤以分离出埃博霉素B，除去埃博霉素B的发酵液返回到发酵罐中继续发酵；发酵120～168h后对第二分离装置中分离出的埃博霉素B进行洗脱，并收集洗脱液；整个发酵过程将发酵罐中的发酵液交替通入到第一分离装置和第二分离装置中，待发酵罐中的发酵液发酵15d后，停止发酵，最后合并收集的洗脱液，浓缩得到埃博霉素B。