[发明专利]一种利用黄花牛耳朵叶片快速繁殖其种苗的方法

摘要

本发明公开了一种利用黄花牛耳朵叶片快速繁殖其种苗的方法，通过对其外植体进行初代培养、继代培养和炼苗移栽，经“初代培养→继代培养”两步法直接成苗，可在90天左右繁殖获得大量健壮小苗，无需经过生根阶段，而且继代培养不需添加激素，不仅减少了生产环节，而且降低了生产成本，实现黄花牛耳朵有效繁殖。本方法不仅取材方便，不会影响黄花牛耳朵野生种群的数量；而且操作简单、生产成本低、稳定高效，能大大缩短育苗周期，将为其保护和开发利用提供技术保障。

主权项

一种利用黄花牛耳朵叶片快速繁殖其种苗的方法，包括如下步骤：（1）外植体处理：取黄花牛耳朵叶片为外植体，用清水洗去其表面的尘土，将其放入50%多菌灵可湿粉剂1g/L+抗坏血酸0.8g/L+青霉素100 IU/L +链霉素100µg/L配成的混合消毒液中浸泡15~20min，洗洁精水洗1 min，流水冲洗15~20min；转移到超净工作台中，用75%酒精浸泡6~10s，无菌水冲洗2~3次，再用0.1%升汞溶液浸泡消毒7~10min，无菌水冲洗3~4次，最后用无菌滤纸吸干外植体表面水分；（2）外植体的初代培养：将处理后的外植体用解剖刀切成1.5cm×1.0cm的小块，在超净工作台中晾4~6min，接种于MS+TDZ0~0.1mg/L +6‑BA0.1~0.5mg/L+NAA0.05~0.5mg/L + 蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L， pH5.8的培养基中，培养50天，培养温度25±2℃，光照时间12h/d，光照强度2000~3000lx；（3）继代培养：经初代培养后，叶片边缘、表面诱导产生大量小苗，将小苗接入MS+0.1%活性炭+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L，pH5.8的培养基中培养，培养温度25±2℃，光照时间12h/d，光照强度2000~3000lx；继代3天开始有根发生，培养35~40天长成完整健壮小苗，株高2‑3cm，根的数目为8‑20根；（4）炼苗与移栽：待黄花牛耳朵小苗株高2~3cm时，打开培养瓶盖，在室温下炼苗7天后，将小苗移栽至珍珠岩:蛭石＝1:1混合的基质中。