[发明专利]基因DNA序列捕获探针的制备方法

摘要

本发明公开了一种基因DNA序列捕获探针的制备方法，技术方案为：1）、设计两条部分互补的引物，经退火处理后形成一个部分双链结构的开叉形接头，与目标基因的普通PCR扩增产物（A1）进行连接反应，得到两端带有接头的目标基因（A2）；2）、针对接头序列设计相应的引物，对所述A2进行扩增，得到带有T7启动子的扩增产物（A3）；3）、对上述产物（A3）进行定量后，在一定的条件下，加入带有生物素标记的NTP(其中UTP上标记生物素，其他ATP，CTP，GTP不标记)，进行体外转录反应，最终得到带有生物素标记的RNA探针（基因DNA序列捕获探针）。

主权项

1.基因DNA序列捕获探针的制备方法，其特征是包括以下步骤：一、制备接头：1）、设计两条部分互补的引物，所述两条引物之间的互补度为30～50%；其中一条引物中含有T7启动子序列且该条引物的5’末端有一个突出的T；2）、配制反应液进行反应：共100μl，混匀；反应条件为：将上述混合液进行94℃保温10分钟，然后取出进行缓慢冷却至室温实现退火；从而形成一个部分双链结构的开叉形接头；二、将上述部分双链结构的开叉形接头与目标基因的普通PCR扩增产物（A1）进行连接反应，从而得到两端带有接头的目标基因（A2）；所述反应体系为：反应条件为16℃，1小时，从而得到两端带有接头的目标基因（A2）；三、针对部分双链结构的开叉形接头序列设计相应的引物-----2个通用引物，对所述两端带有接头的目标基因（A2）进行扩增，得到带有T7启动子的扩增产物（A3）；PCR反应体系如下：PCR反应程序为：94℃预变性5分钟；94℃变性30秒，62℃退火30秒，72℃延伸1分钟，共15个循环；然后72℃额外延伸10分钟，将所得的带有T7启动子的扩增产物（A3）4℃保存；四、对上述带有T7启动子的扩增产物（A3）进行定量后，加入带有生物素标记的NTP，进行体外转录反应，最终得到基因DNA序列捕获探针；所述NTP中，UTP上标记生物素，ATP、CTP、GTP不标记。