[发明专利]利用DNA免疫共沉淀分离和鉴定DNA结合蛋白的方法有效
申请号: | 201410042740.1 | 申请日: | 2014-01-29 |
公开(公告)号: | CN103739664B | 公开(公告)日: | 2017-01-18 |
发明(设计)人: | 赵晓航;许杨;林正伟;郭志敏;赵楠 | 申请(专利权)人: | 中国医学科学院肿瘤医院;中国人民解放军海军总医院 |
主分类号: | C07K1/14 | 分类号: | C07K1/14;C07K1/26;G01N27/62 |
代理公司: | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所11038 | 代理人: | 李英 |
地址: | 100021 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明涉及一种分离鉴定DNA结合蛋白的方法,具体涉及利用DNA免疫共沉淀技术分离鉴定DNA结合蛋白的方法。所述分离方法包括提取细胞的核蛋白;将目标DNA分子与核蛋白混合;加入能够与该目标DNA分子结合的分子实体,分离得到与目标DNA分子结合的核蛋白组分;对得到的核蛋白组分进行进一步分离,得到DNA结合蛋白。所述鉴定方法还包括对分离得到的DNA结合蛋白进行鉴定的步骤。本发明的方法具有稳定性和重复性好的特点,显著提高了鉴定未知DNA结合蛋白的实验效率。为深入研究细胞基因转录调控、基因转录的分子行为、分子肿瘤学、细胞生物学、生物化学等学科提供了有益的帮助。 | ||
搜索关键词: | 利用 dna 免疫 共沉淀 分离 鉴定 结合 蛋白 方法 | ||
【主权项】:
一种分离DNA结合蛋白的方法,所述方法包括以下步骤:1)提取细胞的核蛋白;2)将目标DNA分子与核蛋白混合,孵育;3)加入能够与该目标DNA分子结合的分子实体,分离得到与目标DNA分子结合的核蛋白组分;4)对步骤3)得到的核蛋白组分进行进一步分离,得到DNA结合蛋白;其中在步骤1)后还包括去除核蛋白中无关高丰度蛋白的步骤;所述去除核蛋白中无关高丰度蛋白包括将非特异DNA分子与核蛋白混合的步骤,所述非特异DNA分子能够与无关高丰度蛋白结合;其中所述的目标DNA分子选自基因的调控基因部分;其中所述的非特异DNA分子选自基因组中的外显子DNA部分,其长度为大于100bp。
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