[发明专利]华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂、试剂盒及其检测方法

摘要

本发明公开了一种华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂、试剂盒及其检测方法，所述检测试剂是针对以华支睾吸虫ITS1基因和广州管圆线虫ITS2基因的保守片段为靶目标的两组组分，两组组分各自包括一对特异性引物、一条特异性探针和一条内标探针。试剂盒包括PCR混合液、Taq DNA聚合酶、DEPC-H₂O、阳性质控品、阴性质控品和假病毒内标溶液；PCR混合液中含有检测试剂。检测方法包括：总DNA提取、反应组分配制、扩增、结果判定。本发明的试剂和试剂盒特异性强、灵敏度高、无污染、高通量、可对食品中肉眼不可见的寄生虫幼虫进行准确检测，检测方法快速、特异、敏感、可同时检测大量样品。

主权项

一种华支睾吸虫和广州管圆线虫双重实时荧光PCR检测试剂，其特征在于，所述检测试剂包括华支睾吸虫检测组分、广州管圆线虫检测组分和内标序列检测组分；其中，华支睾吸虫检测组分是针对以华支睾吸虫 ITS1基因的保守片段为靶目标的，包括：引物：CS‑PF：5′‑CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTC‑3′CS‑PR：5′‑CAGCATGCATGCGGAACATA‑3′探针： CS‑Pb229：5′‑CTGCCTAGGGCGGAGCGATCCTAG‑3′；所述华支睾吸虫 ITS1基因的保守片段的扩增目标核苷酸序列为：CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTCTTGCAGCATTGTCTGCCTAGGGCGGAGCGATCCTAGTTCCGTCATGTTCTACATGTATGTTCCGCATGCATGCTG；所述广州管圆线虫检测组分包括：广州管圆线虫检测组分是针对以广州管圆线虫ITS2基因的保守片段为靶目标的，包括：引物：Can‑PF：5′‑CGCATGATATTAAAAGACGTTGCT‑3′Can‑PR：5′‑GTAAACGCACAAAACGCACG‑3′探针：Can‑Pb：5′‑CCGCGGCGCATTCGACCAT‑3′；所述广州管圆线虫 ITS2基因的保守片段的扩增目标核苷酸序列为：CGCATGATATTAAAAGACGTTGCTGCCGCGGCGCATTCGACCATGGCTTGTCGTCGGCTGTCGAATGGTGGCGTGCGTTTTGTGCGTTTAC；所述内标序列检测组分包括：内标引物：IC‑PF：5′‑CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTC‑3′IC‑PR：5′‑CAGCATGCATGCGGAACATA‑3′；内标探针：IC‑PB：5′‑CTCTCTCGCTCGCAACGATCGTCG‑3′用于制作假病毒内标的扩增核苷酸序列为：CGATTCTAGTTCCGTCATCTGTCTTGCAGCATTGTCTCTCTCGCTCGCAACGATCGTCGTTCCGTCATGTTCTACATGTATGTTCCGCATGCATGCTG；所述华支睾吸虫检测组分的探针和广州管圆线虫检测组分的探针以及内标探针的5′端有用荧光染料标记的荧光报告基团，所述华支睾吸虫检测组分的探针和广州管圆线虫检测组分的探针以及内标探针的3′端有用淬灭荧光染料标记的荧光淬灭基团。