[发明专利]克隆方法有效
| 申请号： | 201380017487.8 | 申请日： | 2013-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN104204205B | 公开（公告）日： | 2017-06-27 |
| 发明（设计）人： | 约翰尼斯·安德列什·劳博斯;赫尔曼·扬·佩尔;伯纳德·迈瑞克 | 申请（专利权）人： | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/90 |
| 代理公司： | 北京东方亿思知识产权代理有限责任公司11258 | 代理人： | 肖善强 |
| 地址： | 荷兰*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | 本发明涉及用于制备两种或更多种标准化的表达盒的方法，所述方法包括a.提供两组或更多组元件序列，每组元件序列一起构成至少一种功能性表达盒，各元件序列两侧侧翼为IIs型限制内切酶切割位点，之后是其识别位点，所述IIs型限制内切酶识别位点和切割位点被选择成使得所述元件序列的组可组装成功能性表达盒；b.提供至少两种骨架入门载体，各骨架入门载体按以下这种顺序包含(i)限制酶切割位点与其识别位点，和第一连接物序列(LF)；(ii)包含可选择标记基因的载体骨架；以及(iii)第二连接物序列(RF)，和限制酶识别位点与其切割序列；以及(iv)任选地，在(i)和(iii)的识别位点之间的插入物，任何骨架入门载体上的连接物序列RF和LF被选择成使得其可分别与相同或不同骨架入门载体上的LF或RF连接物序列组装；以及c.使用基于经由所述切割位点使用限制酶消化和连接的方法，在至少两种骨架入门载体中组装所述两组或更多组元件序列作为功能性表达盒，从而制备两种或更多种标准化的表达盒。 | ||
| 搜索关键词： | 克隆 方法 | ||
【主权项】：
一种用于制备两种或更多种标准化的表达盒的方法，所述方法包括：a.提供两组或更多组元件序列，每组元件序列一起构成至少一种功能性表达盒，各元件序列的两侧侧翼为IIs型限制核酸内切酶切割位点，之后是其识别位点，所述IIs型限制核酸内切酶识别位点和切割位点被选择成使得元件序列的组可组装成功能性表达盒；b.提供至少两种骨架入门载体，各骨架入门载体按以下这种顺序包含：(i)IIs型限制酶切割位点与其识别位点，和第一连接物序列(LF)；(ii)包含可选择标记基因的载体骨架；以及(iii)第二连接物序列(RF)，和IIs型限制酶识别位点与其切割序列；任何骨架入门载体上的所述连接物序列RF和LF被选择成使得其可分别与相同或不同骨架入门载体上的LF或RF连接物序列进行组装；所述连接物序列为左和右侧翼DNA序列，左和右连接物序列为适合使用序列同源性进行组装的序列，以及c.使用基于使用IIs型限制酶消化和经由切割位点连接的方法，在至少两个骨架入门载体中组装所述两组或更多组元件序列作为功能性表达盒；从而制备两种或更多种标准化的表达盒。
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