[发明专利]一种在大肠杆菌中一步法合成DNA片段并组装合成基因的方法有效
申请号: | 201310753413.2 | 申请日: | 2013-12-31 |
公开(公告)号: | CN103725674A | 公开(公告)日: | 2014-04-16 |
发明(设计)人: | 马立新;陈晚苹;陈羽西;汪晓娟;杨琥;余先红 | 申请(专利权)人: | 湖北大学 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12N15/70 |
代理公司: | 武汉金堂专利事务所 42212 | 代理人: | 丁齐旭 |
地址: | 430062 湖北*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | 本发明提出了一种在大肠杆菌中一步法合成DNA片段并组装合成基因的方法,主要步骤包括:构建LIC载体质粒LIC-A;制备LIC-A线性载体;构建组装DNA片段的受体载体puc-Kana;选择目标基因,划分300bp左右的小片段进行合成;多个小片段DNA利用金门克隆反应组装成大片段基因。本发明操作简单,无需再重复做克隆和测序的操作,直接退火,克隆效率高,使用了发光报告基因sfgfp、gfp,筛选方法直观,合成方法的错误率很低,合成基因的周期短,大大节约了成本,节约了时间。本发明适用于各种基因的合成,对于大基因的合成特别有效。 | ||
搜索关键词: | 一种 大肠杆菌 一步法 合成 dna 片段 组装 基因 方法 | ||
【主权项】:
一种在大肠杆菌中一步法合成DNA片段并组装合成基因的方法,其特征在于主要步骤包括:构建LIC载体质粒LIC‑A;LIC‑A线性载体的制备;构建组装DNA片段的受体载体puc‑Kana;选择目标基因,划分300bp左右的小片段进行合成;多个小片段DNA用金门克隆反应组装成大片段基因。
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