[发明专利]一种矮马精液冷冻保存的方法

摘要

本发明公开了一种矮马精液冷冻保存的方法，将矮马精液与特别研制的冷冻保存稀释液混合后，进行程序化降温，最后保存于液氮中。本发明的冷冻保存稀释液可以有效延长矮马精子的使用寿命；通过程序化降温有效地控制降温速度，避免精子受到损伤，提高冷冻效果和解冻后精子的质量。

主权项

一种矮马精液冷冻保存的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将鸡蛋的卵黄经高速离心后，取上层卵黄备用；（2）制备冷冻保存稀释液，每100mL冷冻保存稀释液中，包括葡萄糖3.4～3.8g、乳糖7.0～7.4g、柠檬酸钠0.2～0.6g、上层卵黄4.8～5.2mL、二甲基酰胺4.8～5.2mL、维生素E0.04～0.08g、青霉素8～12万单位、链霉素8～12万单位；制备时先将除上层卵黄以外的其他组分溶解于适量无菌蒸馏水中，再加入上层卵黄，搅拌25～35min，再用孔径0.3～0.5μm的滤器过滤，即得冷冻保存稀释液。（3）采集矮马精液后，过滤去除胶状物质，经离心后除去上层精清；（4）按精液、冷冻保存稀释液的体积比3:1的比例，将冷冻保存稀释液缓慢倒入预处理后的精液中，轻轻摇晃使精液与稀释液充分接触、混匀；（5）将稀释后的矮马精液分装至细管中封口，使用程序降温仪进行程序化降温，降温程序为：预设20℃启动程序，缓慢降温至5℃停留5min，快速降温至‑10℃停留2min，随后快速降温，当温度降至‑43℃后，快速取出细管转入液氮中保存。