[发明专利]一种矮马精液冷冻保存的方法

权利要求书

1.一种矮马精液冷冻保存的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将鸡蛋的卵黄经高速离心后，取上层卵黄备用；

（2）制备冷冻保存稀释液，每100mL冷冻保存稀释液中，包括葡萄糖3.4～3.8g、乳糖7.0～7.4g、柠檬酸钠0.2～0.6g、上层卵黄4.8～5.2mL、二甲基酰胺4.8～5.2mL、维生素E0.04～0.08g、青霉素8～12万单位、链霉素8～12万单位；制备时先将除上层卵黄以外的其他组分溶解于适量无菌蒸馏水中，再加入上层卵黄，搅拌25～35min，再用孔径0.3～0.5μm的滤器过滤，即得冷冻保存稀释液。

（3）采集矮马精液后，过滤去除胶状物质，经离心后除去上层精清；

（4）按精液、冷冻保存稀释液的体积比3:1的比例，将冷冻保存稀释液缓慢倒入预处理后的精液中，轻轻摇晃使精液与稀释液充分接触、混匀；

（5）将稀释后的矮马精液分装至细管中封口，使用程序降温仪进行程序化降温，降温程序为：预设20℃启动程序，缓慢降温至5℃停留5min，快速降温至-10℃停留2min，随后快速降温，当温度降至-43℃后，快速取出细管转入液氮中保存。

2.按照权利要求1所述的矮马精液冷冻保存的方法，其特征在于：步骤（1）中，鸡蛋的卵黄离心时的转速为10000r/m，离心时间为30min。

3.按照权利要求1所述的矮马精液冷冻保存的方法，其特征在于：步骤（2）中，每100mL冷冻保存稀释液中，包括葡萄糖36g、乳糖7.2g、柠檬酸钠0.4g、上层卵黄5.0mL、二甲基酰胺5.0mL、维生素E0.06g、青霉素10万单位、链霉素10万单位；制备时制备时先将除上层卵黄以外的其他组分溶解于适量无菌蒸馏水中，再加入上层卵黄，搅拌30min，再用孔径0.4μm的滤器过滤，即得冷冻保存稀释液。

4.按照权利要求1所述的矮马精液冷冻保存的方法，其特征在于：步骤（3）中，采集矮马精液后，用灭菌的双层200目尼龙网过滤去除胶状物质，离心时的转速为1200r/min，离心时间为7min。

5.按照权利要求1所述的矮马精液冷冻保存的方法，其特征在于：步骤（4）中，冷冻保存稀释液需先预热到37℃。

6.按照权利要求1所述的矮马精液冷冻保存的方法，其特征在于：步骤（5）中，稀释后的矮马精液先在25℃静置1h，再分装至细管中封口。