[发明专利]体外培养肝样细胞的方法及采用该方法培养的优化后肝样细胞有效
| 申请号： | 201310656309.1 | 申请日： | 2013-12-06 |
| 公开（公告）号： | CN104694456B | 公开（公告）日： | 2018-05-29 |
| 发明（设计）人： | 潘国宇 | 申请（专利权）人： | 中国科学院上海药物研究所 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 北京金信知识产权代理有限公司 11225 | 代理人： | 朱梅;徐琳 |
| 地址： | 201203 上海*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种获得优化后肝样细胞的体外培养方法以及采用该方法获得的优化后肝样细胞。所述体外培养方法包括采用三明治细胞培养法、无血清培养和诱导培养基。获得的优化后肝样细胞接近原代肝脏细胞的结构和功能，其药物转运体、胆酸转运体和/或胆酸合成酶的表达水平显著高于传统肝样细胞；其药物胆汁分泌指数(BEI)和内在胆汁清除率(CLb,int)显著高于传统肝样细胞；其出现药物转运体的极化表达。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞 体外培养 药物转运体 优化 胆酸 合成酶 三明治 生物技术领域 无血清培养 细胞培养法 诱导培养基 表达水平 胆汁分泌 胆汁清除 肝脏细胞 转运体 极化 | ||
【主权项】：
1.一种获得优化后肝样细胞的体外培养方法，其包括：步骤1、采用三明治细胞培养法培养传统肝样细胞；步骤2、撤除原有培养基，换用诱导培养基继续培养3-5天，获得优化后肝样细胞；其中，所述诱导培养基为无血清培养基，并且所述诱导培养基含有选自cAMP、3MC、PB、TCA和VPA中的一种核受体激动剂，或者含有cAMP和PB，或者含有cAMP、3MC和PB，或者含有cAMP、PB和TCA，或者含有cAMP、3MC、PB和TCA，上述各核受体激动剂在所述诱导培养基中的浓度范围分别为cAMP 1-10μM、3MC 1-10μM、PB 10-100μM、TCA 5-50μM和VPA 0.2-4μM；其中，所述传统肝样细胞为直接转分化技术和胚胎干细胞或多功能干细胞诱导分化技术诱导的肝样细胞；其中，所述传统肝样细胞转染了肝细胞核因子，所述肝细胞核因子选自肝细胞核因子4α(Hnf4α)和肝细胞核因子4A(HNF4A)。
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