[发明专利]一种固定化3-苯氧基苯甲酸降解酶及其制备方法

摘要

本发明公开了一种固定化3-苯氧基苯甲酸降解酶的制备方法，属于固定化酶领域。包括如下步骤：（1）将鞘氨醇单胞菌（Sphingomonassp.）SC-1发酵液离心，收集菌体，菌体与Tris-HCl缓冲液混匀后冰水浴超声破碎，离心去除胞内酶，细胞碎片沉淀用Tris-HCl缓冲液加至破碎前体积制成酶液；（2）将此酶液与海藻酸钠溶液按一定比例均匀混合，均匀滴落于氯化钙溶液中进行包埋固定化。本发明制备的固定化3-苯氧基苯甲酸降解酶，在宽温度(4℃-40℃)和宽pH(5.0-9.0)具有较高的酶活，且具有较强的连续反应性能，制备方法简单，生产成本低。

主权项

一种固定化3‑苯氧基苯甲酸降解酶的制备方法，具体制备步骤如下：(1)鞘氨醇单胞菌SC‑1发酵液离心，收集菌体，菌体混匀于缓冲液后破碎，离心除去胞内酶液，得沉淀A；用缓冲液重复2次清洗沉淀A，离心除去上清，得沉淀B（即细胞碎片），再用缓冲液重悬沉淀B，制成3‑苯氧基苯甲酸降解酶液；(2)将此酶液按一定比例混匀于海藻酸钠溶液中，用注射器针头将其滴入CaCl2溶液中，低温（4℃）下固定化成海藻酸钙凝珠，经缓冲液清洗3次除去表面残留酶液后，制成固定化3‑苯氧基苯甲酸降解酶凝珠。