[发明专利]重组马流感病毒毒株、其制备方法及由其制备得到的疫苗在审
申请号: | 201310589569.1 | 申请日: | 2013-11-20 |
公开(公告)号: | CN103602638A | 公开(公告)日: | 2014-02-26 |
发明(设计)人: | 刘明;刘春国;相文华;刘大飞;张云;曲连东 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 |
主分类号: | C12N7/01 | 分类号: | C12N7/01;C12N15/63;A61K35/76;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93 |
代理公司: | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 11139 | 代理人: | 孙皓晨;韩小雷 |
地址: | 150001 黑龙*** | 国省代码: | 黑龙江;23 |
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摘要: | 本发明公开了一种重组马流感病毒毒株、其制备方法及由其制备得到的疫苗。该重组马流感病毒包含:马流感病毒A/equine/xinjiang/3/07(H3N8)株的HA和NA基因,以及流感病毒A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai(H1N1)(A/PR/8/34(H1N1,简称PR8病毒)的PB2、PB1、PA、NP、M和NS六个内部基因。本发明的一种马流感重组病毒毒株、命名为rH3N8-PR,该毒株的保藏号为CGMCC NO.8161。本发明还公开了该马流感重组病毒的制备方法以及由其制得的疫苗。与亲本株相比,本发明的马流感重组病毒在鸡胚和MDCK细胞上均能产生很高的病毒滴度和血凝效价,而且对小鼠的致病性显著降低,实验结果表明由本发明的马流感重组病毒制得的疫苗具有良好的免疫原性和保护效力。 | ||
搜索关键词: | 重组 流感病毒 制备 方法 得到 疫苗 | ||
【主权项】:
一株重组马流感病毒(Equine influenza virus),其特征在于所述的重组马流感病毒是通过以下方法制备得到的:(1)将马流感病毒A/equine/xinjiang/3/07(H3N8)株的HA基因插入到流感基因转录/表达双向载体中,获得含马流感病毒HA基因的重组质粒;(2)将马流感病毒A/equine/xinjiang/3/07(H3N8)株的NA基因插入到流感基因转录/表达双向载体中,获得含马流感病毒NA基因的重组质粒;(3)将流感病毒A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai(H1N1)的六个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M和NS分别插入到流感基因转录/表达双向载体中,分别获得含有各基因的重组质粒;(4)将以上获得的8个重组质粒共转染293T细胞和MDCK细胞共培养细胞单层,转染的细胞经培养后,反复冻融3次,使细胞裂解,释放出病毒粒子,将含有细胞裂解物的培养液离心后,取上清液接种SPF鸡胚,培养2‑3天后,取鸡胚尿囊液,检测其血凝活性,获得重组马流感病毒。
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