[发明专利]重组马流感病毒毒株、其制备方法及由其制备得到的疫苗在审
| 申请号： | 201310589569.1 | 申请日： | 2013-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN103602638A | 公开（公告）日： | 2014-02-26 |
| 发明（设计）人： | 刘明;刘春国;相文华;刘大飞;张云;曲连东 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/63;A61K35/76;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 11139 | 代理人： | 孙皓晨;韩小雷 |
| 地址： | 150001 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 流感病毒 制备 方法 得到 疫苗 | ||
1.一株重组马流感病毒（Equine influenza virus），其特征在于所述的重组马流感病毒是通过以下方法制备得到的：
（1）将马流感病毒A/equine/xinjiang/3/07(H3N8)株的HA基因插入到流感基因转录/表达双向载体中，获得含马流感病毒HA基因的重组质粒；
（2）将马流感病毒A/equine/xinjiang/3/07(H3N8)株的NA基因插入到流感基因转录/表达双向载体中，获得含马流感病毒NA基因的重组质粒；
（3）将流感病毒A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai(H1N1)的六个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M和NS分别插入到流感基因转录/表达双向载体中，分别获得含有各基因的重组质粒；
（4）将以上获得的8个重组质粒共转染293T细胞和MDCK细胞共培养细胞单层，转染的细胞经培养后，反复冻融3次，使细胞裂解，释放出病毒粒子，将含有细胞裂解物的培养液离心后，取上清液接种SPF鸡胚，培养2-3天后，取鸡胚尿囊液，检测其血凝活性，获得重组马流感病毒。
2.如权利要求1所述的重组马流感病毒，其特征在于所述的流感基因转录/表达双向载体为pHW2000。
3.如权利要求1所述的重组马流感病毒，其特征在于所述的马流感病毒A/equine/xinjiang/3/2007(H3N8)株的HA基因具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列具有95%以上同源性的核苷酸序列。
4.如权利要求1所述的重组马流感病毒，其特征在于所述的马流感病毒A/equine/xinjiang/3/2007(H3N8)株的NA基因具有SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列，或与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列具有95%以上同源性的核苷酸序列。
5.如权利要求1所述的重组马流感病毒，其特征在于流感病毒A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai(H1N1)的六个内部基因PB2、PB1、PA、NP、M和NS的核苷酸序列分别为SEQ ID NO.3-8所示，或与SEQ ID NO.3-8所示的核苷酸序列具有95%以上同源性的核苷酸序列。
6.如权利要求1-5任一项所述的重组马流感病毒，其特征在于所述的重组马流感病毒命名为rH3N8-PR，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏号为CGMCC No.8161。
7.权利要求1-6任一项所述的重组马流感病毒在制备预防或治疗马流感药物中的应用。
8.一种马流感疫苗，其特征在于由下述方法制备：用权利要求1-6任一项所述的重组马流感病毒接种SPF鸡胚或MDCK细胞，收获鸡胚尿囊液或细胞培养上清，即得。
9.一种疫苗组合物，其特征在于包含权利要求8所述的马流感疫苗，以及药物学上可接受的载体、佐剂或赋形剂。
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